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标题: BCA定量以及SDS-PAGE前外泌体的处理 [打印本页]
作者: sunshine    时间: 2016-5-7 15:42
标题: BCA定量以及SDS-PAGE前外泌体的处理
本帖最后由 sunshine 于 2016-5-8 13:08 编辑


作者: baiyu    时间: 2018-2-24 03:08
为什么不是两者都加呢？用途不冲突啊
作者: 1055127297    时间: 2018-5-28 21:48
答案是什么
作者: 巨婴时代    时间: 2018-7-31 09:15
两个都要加啊
作者: kao3234659    时间: 2018-8-15 05:10
都不需要，提出来的外泌体直接-80冷冻就可以了。BCA和SDS-PAGE不用裂解， 外泌体膜很容易破。
作者: 马雪情    时间: 2018-10-24 11:24
需要加裂解液吧，文献报道的结论不一致呢，有些说-80℃冻融后外泌体会破碎，但有些报道结论却说富集的外泌体在-80℃可以保存6个月而形态没有太大的变化；到底哪个正确？想请教下各位。
作者: yangxuejiao    时间: 2018-10-25 11:41
想一起学习
作者: jiaolong2018    时间: 2018-10-29 15:20
哪位大佬有外泌体wb具体步骤啊？小白学习下。。。
作者: 805580262    时间: 2018-11-6 09:36
jiaolong2018 发表于 2018-10-29 15:20
哪位大佬有外泌体wb具体步骤啊？小白学习下。。。

同学，有具体的protocol 了么？可以分享下么
作者: zhaojing    时间: 2018-11-28 17:52
805580262 发表于 2018-11-6 09:36
同学，有具体的protocol 了么？可以分享下么

同求具体的步骤呀。对于裂不裂解，加多少BUFFER之类的很困惑
作者: bokelu    时间: 2019-3-19 09:44
马雪情 发表于 2018-10-24 11:24
需要加裂解液吧，文献报道的结论不一致呢，有些说-80℃冻融后外泌体会破碎，但有些报道结论却说富集的外泌 ...

昨天看到一个帖子中的文献说-80解冻以后外泌体表面的蛋白会从膜上解离进入上清，外泌体体积会增大25%左右。你说的这个-80度六个月形态变化不大是在哪里看的，能不能给个文献。
作者: 邱邱--    时间: 2019-3-25 18:54
有没有小伙伴可以交流经验，实验卡住好久做不出来
作者: hzangs    时间: 2019-5-29 14:25
邱邱-- 发表于 2019-3-25 18:54
有没有小伙伴可以交流经验，实验卡住好久做不出来

这个实验先跳过。 可以先做别的实验。这个现在不是很重要
作者: CheungKL    时间: 2019-6-15 11:13
同求protocol
作者: DBLB    时间: 2019-10-20 14:50
hzangs 发表于 2019-5-29 14:25
这个实验先跳过。 可以先做别的实验。这个现在不是很重要

现在还是希望有一个比较好的蛋白浓度用来做质谱，如果蛋白浓度太低，那就需要很大量的细胞上清去提取细胞外囊泡。
作者: ljcheshen    时间: 2020-1-9 14:36
hzangs 发表于 2019-5-29 14:25
这个实验先跳过。 可以先做别的实验。这个现在不是很重要

你好hzangs，我已经弄了电镜和NTA，剩western没弄，但可以先做细胞或者动物，western标志物再慢慢跑是这个意思吗
作者: ljcheshen    时间: 2020-1-9 14:37
hzangs 发表于 2019-5-29 14:25
这个实验先跳过。 可以先做别的实验。这个现在不是很重要

是不是鉴定里电镜和NTA的分量是不是更g高？ rg
作者: 橘子味ss    时间: 2020-2-29 14:48
同求protocol
作者: muyue    时间: 2020-8-14 16:11
同求protocol
作者: zzzly    时间: 2021-12-23 20:02

科研小白，零基础着手外泌体相关，用的BV2小胶质细胞，饥饿处理24h 70ml上清超速离心提外泌体，离心后看到了白色的沉淀，BCA测浓度为0.25ug/ul左右，但是WB什么都跑不出来  想请教下这是怎么回事，是不是没有提出来外泌体
作者: wane12345    时间: 2022-1-25 16:51
超离的纯度不够杂蛋白太多，很难做出漂亮的WB，我用的磁珠法试剂盒20ml上清，2小时，BCA浓度0.51mg/ml，做出的WB背景非常低，几乎没有杂带
作者: Dr.DDD    时间: 2022-7-11 10:28
wane12345 发表于 2022-1-25 16:51
超离的纯度不够杂蛋白太多，很难做出漂亮的WB，我用的磁珠法试剂盒20ml上清，2小时，BCA浓度0.51mg/ml，做 ...

你好，请问你BCA定量有+RIPA吗
作者: ZCJG    时间: 2022-8-15 00:26
同求protocol
作者: 发货33    时间: 2022-9-12 10:11
在欧洲诸语言中，蔷薇、玫瑰、月季都是使用同一个词，如英语是rose，德语是Die Rose。玫瑰是英国、美国等14个国家的国花。通俗意义中的“玫瑰”已成为多种蔷薇属植物的通称。且事实上杂交玫瑰也是由蔷薇属下各物种杂交选育所产生。据化石考证，在千万年前地球上已经有了蔷薇属植物。玫瑰属于蔷薇科蔷薇属，和蔷薇属的很多种花卉一样

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