外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

标题: 外泌体提取蛋白做western检测标记物 [打印本页]

作者: 小孔加油    时间: 2016-6-22 20:28
标题: 外泌体提取蛋白做western检测标记物
  各位同行,在采用超速离心发提取外泌体后,提取蛋白,western测CD63和CD9,最后结果没有跑出条带,考虑是不是浓度太低的缘故,可看文献中报道的结果都很好。请问各位有没有遇到这种情况,是如何解决的。非常感谢!


作者: 小孔加油    时间: 2016-6-25 09:24
谢谢解答!
作者: 小孔加油    时间: 2016-6-25 09:27
Johnny 发表于 2016-6-24 17:24
超离得到exosome pellet可用裂解液或直接loading buffer煮了跑WB

请问一般加多少裂解液或者loading buffer?
作者: 五月灼蓁    时间: 2017-5-19 19:01
Johnny 发表于 2016-6-24 17:24
超离得到exosome pellet可用裂解液或直接loading buffer煮了跑WB

你好,想请问一个问题,我看到网站里有人说要用非还原性的loading buffer,那配裂解液的时后是不是不加DTT就可以了
作者: 18940258208    时间: 2017-5-30 16:55
Johnny 发表于 2016-6-26 12:08
这 看你外泌体量多少啊   少加点儿  100微升试试呗

你好,我想求助!关于exosome蛋白的western blot,我做的是CD63的鉴定,用的是Qiagen厂家的exoEasy Maxi kit试剂盒提取的细胞上清15ml的外泌体(共6个不同时间点的样本),最后溶于500ul XE buffer。前后一共做了6次WB,起初是没有用裂解液,配的10%胶,直接取20ul加相应的loading buffer,100度变性后上样,然后出来的条带是连续一条直线,之后改了各种试剂及条件,仍是一条线,我怕是自己的技术问题,同时期同条件下还跑了以前剩余的普通蛋白标本,杂的是GAPDH,跑出来的泳道间隔都没问题,证实我的技术还行。于是在最后一次加了裂解液(MPER+PMSF)后,显影竟然是白板,Oh MY GOD,我想死的心都有了。也翻阅了好多文献,但是都不是说的很具体详细
作者: Marvel    时间: 2017-6-2 20:13
不是说并非所有的外泌体都高表达CD9,CD63,CD81,只要其中一个或两个高表达就好了吗?我做的细胞,它的外泌体也就只有CD9高表达,CD81和TSG101表达量跟细胞裂解液差不多,而且没有beta-actin,GAPDH和HSP90.应该是不一样的外泌体不一样的marker。
作者: meiling    时间: 2017-6-7 21:43
Johnny 发表于 2016-6-24 17:24
超离得到exosome pellet可用裂解液或直接loading buffer煮了跑WB

为什么不能用PBS重悬呢?
作者: Hanker    时间: 2017-6-8 10:16
meiling 发表于 2017-6-7 21:43
为什么不能用PBS重悬呢?

同问,我用的试剂盒要用PBS重悬

作者: 八戒在五湖    时间: 2017-6-19 11:44
Marvel 发表于 2017-6-2 20:13
不是说并非所有的外泌体都高表达CD9,CD63,CD81,只要其中一个或两个高表达就好了吗?我做的细胞,它的外 ...

想问你下你的CD9.CD63是哪家公司的啊

作者: Marvel    时间: 2017-10-8 14:13
八戒在五湖 发表于 2017-6-19 11:44
想问你下你的CD9.CD63是哪家公司的啊

CD9是CST的,CD63是abcam的。
作者: zongzhaojing    时间: 2017-12-18 11:42
Johnny 发表于 2016-6-24 17:24
超离得到exosome pellet可用裂解液或直接loading buffer煮了跑WB

请问,裂解外泌体一般需要哪种裂解液,具体怎么处理呢,求教。
作者: Jinyi    时间: 2018-1-22 18:49
Marvel 发表于 2017-6-2 20:13
不是说并非所有的外泌体都高表达CD9,CD63,CD81,只要其中一个或两个高表达就好了吗?我做的细胞,它的外 ...

你做的什么细胞的CD9  有没有蛋白氨基酸序列
作者: 1992caoyan    时间: 2018-11-8 14:21
五月灼蓁 发表于 2017-5-19 19:01
你好,想请问一个问题,我看到网站里有人说要用非还原性的loading buffer,那配裂解液的时后是不是不加DTT ...

同问,想知道需要加DTT吗,谢谢





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