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标题: 怎么比较不同细胞分泌的外泌体的量？ [打印本页]
作者: sldingxiang    时间: 2016-7-2 16:27
标题: 怎么比较不同细胞分泌的外泌体的量？
现有普通细胞和病毒感染后的细胞，想比较这两种细胞分泌的外泌体的量。现在的做法是：用相同的细胞数铺板，两天后取上清，提外泌体，用相同体积的裂解液裂解，作WB时上样上相同的体积，结果显示两种细胞外泌体含量不同。但是现在存在的问题是 两种细胞增殖速度不同，培养两天 取上清后 计数，两者的细胞个数大概是3:4，这样的话，细胞个数不同 分泌的外泌体数量肯定不同。请问 这个思路对吗 还是说做WB之前必须要BCA定量 上样上相同量的蛋白？
作者: hereissyk    时间: 2016-7-5 10:47
建议跳过比量，直接比效果，量没有什么精确的方法，意义也不是很大。
作者: sldingxiang    时间: 2016-7-5 15:02
Johnny 发表于 2016-7-4 18:28
理论上你要比较不同细胞分泌的外泌体的量，应该是比较相同的细胞量来源的外泌体的数量 ...

是的 Johnny兄 我也觉得 提外泌体是应该保证细胞量相等，但是细胞转进病毒之后 增殖速度跟转病毒之前就不一样了，如果增殖快的早点提 增殖慢的晚点提，来保证细胞数量相等，那分泌外泌体的时间又不一样了 还是没有可比性见多识广的Johnny兄，有没有什么建议 或者你有没有看到过相似研究的文献？
作者: sldingxiang    时间: 2016-7-5 15:05
hereissyk 发表于 2016-7-5 10:47
建议跳过比量，直接比效果，量没有什么精确的方法，意义也不是很大。

谢谢你的建议。我原本的思路是研究某种基因能否影响外泌体的分泌。。。有看过类似的报道吗？
作者: sldingxiang    时间: 2016-7-5 16:59
Johnny 发表于 2016-7-5 16:42
同hereissyk兄，量没有什么精确的方法，实验操作、仪器本身等各方面误差很大，除非你的细胞分泌的外泌体 ...

嗯 谢谢建议。感觉走到了死胡同，是要改变思路了~
作者: hlqp    时间: 2016-7-5 22:38
请问外泌体要怎么测质量
作者: sldingxiang    时间: 2016-7-6 10:25
hlqp 发表于 2016-7-5 22:38
请问外泌体要怎么测质量

没有测质量 直接做的WB定量
作者: hlqp    时间: 2016-7-6 13:03
那提取外泌体全部过程是不是最好在无菌条件下呢？重悬外泌体的PBS要过滤过吗？谢谢
作者: sldingxiang    时间: 2016-7-7 16:16
hlqp 发表于 2016-7-6 13:03
那提取外泌体全部过程是不是最好在无菌条件下呢？重悬外泌体的PBS要过滤过吗？谢谢 ...

我没有完全无菌，PBS过滤了
作者: hlqp    时间: 2016-7-7 23:45
好的，谢谢，我的DLS结果总是在200多nm左右，不知道为什么？
作者: sldingxiang    时间: 2016-7-8 11:38
hlqp 发表于 2016-7-7 23:45
好的，谢谢，我的DLS结果总是在200多nm左右，不知道为什么？

我也是新手 没做过DLS……你可以去找大神们问问
作者: wqw131343    时间: 2017-6-27 14:09
hlqp 发表于 2016-7-7 23:45
好的，谢谢，我的DLS结果总是在200多nm左右，不知道为什么？

你好，请问你测的DLS时，有用什么校准吗，使用哪种模式啊，谢谢
作者: Docter.Wang    时间: 2018-12-9 11:30
尿液中外泌体看到过用肌酐校准的（PMID:25729563 ）；细胞中能否做细胞计数，用细胞数校准，我觉得可以尝试。



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