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标题: 血清exosome蛋白SDS-PAGE电泳结果求助 [打印本页]

作者: 丝瓜    时间: 2016-7-4 16:34
标题: 血清exosome蛋白SDS-PAGE电泳结果求助
超离+蔗糖垫提取血清exosome后电泳考马斯亮蓝后的结果~~

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有专业人士帮忙分析下么?~
红笔圈出的这一条亮亮的这个很难说是什么呀,这样的图怎么判断外泌体的蛋白纯度呢?

作者: 微泡biomarker    时间: 2016-7-4 21:04
我也做血清但是和你的图差别好大,我们为了减少上样量都用银染,如果你的marker 是在 Alb or igG 那有可能就是呢。
作者: 丝瓜    时间: 2016-7-4 21:39
Johnny 发表于 2016-7-4 18:23
需要抗体杂一下几个exosome marker

经典的maker都没什么问题~~可是不知道这个纯度怎么样
作者: 丝瓜    时间: 2016-7-4 21:41
微泡biomarker 发表于 2016-7-4 21:04
我也做血清但是和你的图差别好大,我们为了减少上样量都用银染,如果你的marker 是在 Alb or igG 那有可能 ...

是嘛?我做了几遍,红线部分一直都是比较浓的。看过ALb和IGg的分子量都不是那个位置。不知道你有没有做过某些所谓的阴性蛋白,就是说exosome没有得maker,跑出来就说明不纯的那些。不过血清的和细胞的有可比性么?
作者: wjy    时间: 2016-7-24 15:14
你红线部分的分子量多大,要是70KD可能是血清的白蛋白。
作者: 丝瓜    时间: 2016-7-25 21:52
wjy 发表于 2016-7-24 15:14
你红线部分的分子量多大,要是70KD可能是血清的白蛋白。

红线是70,上面那条是100.应该是70-100之间的,我跑过血清的,白蛋白的位置跟这个也不一样~~
现在已经把那块抠出来打质谱鉴定了,等鉴定结果
作者: wjy    时间: 2016-7-26 14:44
丝瓜 发表于 2016-7-25 21:52
红线是70,上面那条是100.应该是70-100之间的,我跑过血清的,白蛋白的位置跟这个也不一样~~
现在已经把 ...

哇这么轻易就可以打质谱啊?能弱弱的问一句,你们是自己实验室有质谱还是拿去外面测质谱
作者: 子非鱼    时间: 2016-7-26 15:19
我是想问,血清exosome跑出来都是这么几条带吗?还是说这几条带其实是血清里的高丰度蛋白没清洗干净遗留下来的 啊?也做这方面,困惑ing.....
微泡,你跑出来血清exosome是什么样子的?
作者: 子非鱼    时间: 2016-7-26 15:21
微泡biomarker 发表于 2016-7-4 21:04
我也做血清但是和你的图差别好大,我们为了减少上样量都用银染,如果你的marker 是在 Alb or igG 那有可能 ...

微泡,你跑出来血清exosome是什么样子的?方不方便看看微泡的考染图或银染图图 啊?
作者: 18940258208    时间: 2017-5-30 16:14
求助!关于exosome蛋白的western blot,我做的是CD63的鉴定,用的是Qiagen厂家的exoEasy Maxi kit试剂盒提取的细胞上清15ml的外泌体(共6个不同时间点的样本),最后溶于500ul XE buffer。前后一共做了6次WB,起初是没有用裂解液,配的10%胶,直接取20ul加相应的loading buffer,100度变性后上样,然后出来的条带是连续一条直线,之后改了各种试剂及条件,仍是一条线,我怕是自己的技术问题,同时期同条件下还跑了以前剩余的普通蛋白标本,杂的是GAPDH,跑出来的泳道间隔都没问题,证实我的技术还行。于是在最后一次加了裂解液(MPER+PMSF)后,显影竟然是白板,Oh MY GOD,我想死的心都有了。也翻阅了好多文献,但是都不是说的很具体详细。寻寻觅觅终于找到组织了,求助各位大神




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