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标题: JEV：一种利用流式荧光分选识别外泌体表面EGFR的方法 [打印本页]
作者: 土豆 时间: 2016-7-7 16:47
标题: JEV：一种利用流式荧光分选识别外泌体表面EGFR的方法
外泌体是一种40-130纳米的分泌型细胞外囊泡，目前已经被认为在细胞间通讯、疾病生物标志物和药物传递上有潜在的应用价值。然而，目前对于一个细胞分泌的外泌体的种类、群体以及其功能却知之甚少。为了解决这个问题，需要用到高分辨率的方法。
利用市售的流式细胞仪和直接标记荧光抗体，来自范德堡大学（Vanderbilt University）医学中心的研究人员使用荧光激活囊泡分选（fluorescence-activated vesicle sorting，FAVS）来分析和分选单个的外泌体，这些外泌体首先是通过程序超速离心发从人结肠癌细胞系DiFi细胞中分离出来，然后，EGFR和外泌体标记物CD9可以通过FAVS从单个的外泌体上检测得到。此外，通过高分辨率随机光学重建显微技术（ stochastic optical reconstruction microscopy，STORM）在单个的、约100nm大小的EGFR/CD9双阳性外泌体中检测到了这两个标记物。研究人员目前的证据表明，表皮生长因子受体（EGFR）的活化状态可以使用单克隆抗体（mAb）来评估DiFi细胞来源的外泌体，被称为“构象激活”的EGFR（mAb 806）。使用人抗原特异性抗体，FAVS能够检测来自异种移植DiFi肿瘤的无胸腺裸鼠的血浆中分离的外泌体中的EGFR和CD9。多色FAVS被用来从3个正常个体的人血浆来源的外泌体中同时检测出CD9、EGFR以及一种EGFR配体amphiregulin (AREG)。这些研究证实了FAVS分析和分选外泌体特定表面标记的可行性。研究人员认为，FAVS可以检测循环外泌体的EGFR和AREG，将可能会成为肠癌或其它实体瘤检测的有用工具。
图：DiFi细胞外泌体的FAVS分选以及STORM分析
参考文献：Higginbotham JN, Zhang Q, Jeppesen DK, Scott AM, Manning HC, Ochieng J, Franklin JL, Coffey RJ. (2016) Identification and characterization of EGF receptor in individual exosomes by fluorescence-activated vesicle sorting. J Extracell Vesicles 5:29254.
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