SBI试剂盒提取培养液及血清外泌体protocol

芮苏遥

上个月用了SBI试剂盒提了细胞培液的外泌体，提了三种细胞，有两种细胞同上操作没有看到离心沉淀的外泌体。不知道楼主有没有碰到过这种情况。
收取培液的方法：
细胞密度达约80%后，换无血清的纯培培养48h以上，过程中细胞状态良好。
共收取了35ml的培液，去除细胞碎片后，按照5:1加入SBI exoquick TC，混匀静置过夜离心，未见沉淀

芮苏遥

yuantingdong 发表于 2016-10-21 11:20
我还没做，不过这个应该跟细胞有关吧，另外之前论坛里也有人说，看不见不意味着没有，接着做试试？做了再 ...

好的。我今天用了life的试剂盒提了下细胞培液上清。1ml+0.5ml提取试剂，离心有看到沉淀，还没做过鉴定。不过这是另一种细胞，1毫升的培液上清就能看到沉淀，相比之前35毫升还看不到沉淀的提取让人欣慰多了

芮苏遥

yuantingdong 发表于 2016-10-27 16:14
我用培养液15ml，提出来沉淀挺多的，不过还没鉴定，怎么看到底纯不纯呢？ ...

CD63，CD9，CD81跑WB定量？SBI 说明书后面有写这些是exosomal marker antibodies

芮苏遥

dlwlrma 发表于 2016-10-30 11:37
请问你用的什么细胞呀？1ml就能看到沉淀呀?

我们主要是做消化道肿瘤的，我用的是LOVO-GFP细胞和life的试剂盒，据说沉淀杂质挺多的。要求高的话最好还是超离吧

芮苏遥

katuysha 发表于 2017-3-22 14:09
你好，请问你们做WB了吗？有结果吗？我这两天用life的kit提的细胞上清和血浆的外泌体，WB 都没有结果。 ...

请问你是用多少ml来源的上清和血浆做的啊？我的1ml上清来源外泌体的WB CD68没结果，猜测是外泌体量少，裂解液稀释蛋白，或者抗体不好用

芮苏遥

katuysha 发表于 2017-4-10 13:34
我用的也是1ml的量，WB一个条带都没有。应该是exosomes的量太少，不过我用的血浆样品年代比较久远，不知 ...

请问下，其他来源外泌体的标志蛋白 WB验证 有出条带嘛？

芮苏遥

zergbloody 发表于 2017-4-15 10:54
您好，请问血浆提取的步骤和血清有什么区别呢？我刚开始做，想用SBI的试剂提取血浆外泌体。谢谢！ ...

linvitrogen有针对CM,plasma，serum 的exosome提取试剂盒。最近在做血浆外泌体的提取

芮苏遥

katuysha 发表于 2017-4-18 17:34
kit沉淀完后，加一步洗脱，用大体积的PBS洗去杂蛋白，再离心收集，这样就可以用WB做出结果。只是这样会损 ...

是将试剂盒提取出的外泌体用PBS重悬，然后用10000g再次离心取沉淀的意思吗？请问下大概需要多少的量，谢谢~~~

芮苏遥

katuysha 发表于 2017-4-19 14:13
是的，PBS需要20-30ML，离心力越大越好。

下次试试，非常感谢！