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血清外泌体抽提方法y

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楼主
发表于 2015-8-5 16:35:11 | 显示全部楼层
能给我一份吗
1.For the isolation of exosomes from human umbilical cord Wharton’s jelly-MSCs and human dermal f ...
1040269617@qq.com,
发财楼主效果如何之后跟我们分享一下,谢谢
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沙发
发表于 2015-8-8 23:02:24 | 显示全部楼层
1.        For the isolation of exosomes from human umbilical cord Wharton’s jelly-MSCs and human dermal fibroblasts, serum-free culture medium conditioned for 24 hours was filtered (0.2 m) and concentrated by ultrafiltration device with 100-kDa cutoff (Millipore).
   2.Exosomes in CM were precipitated with one-third volume of polyethylene glycol buffer (33.4% PEG 4000, 50 mmol/L HEPES [pH 7.4], 1 mol/L NaCl) overnight at 4°C, followed by centrifugation at 12 000 g for 5 minutes and resuspension in PBS (pH 7.4).
   3.Exosomes in polyethylene glycol–precipitated fraction were further purified by S200 size-exclusion chromatography. A 75-L sample was applied on a S200 column (Clontech, Mountain View, CA)pre-equilibrated with PBS by spinning at 700 g for 5 minutes, and the exosomal fraction was subsequently eluted in the flow-through by centrifugation at 700 g for 5 minutes.

楼主按zhuyiping的说法,去做的话,你上面的这些要用的东西怎么解决呢?有些压根毒不知道是什么
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发表于 2015-8-10 12:01:20 | 显示全部楼层
暮色恭喜发财 发表于 2015-8-10 10:29
ultrafiltration device with 100-kDa cutoff (Millipore),这就是一个浓缩管
PEG 4000, 50 mmol/L HEP ...

好的,等你的结果
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发表于 2015-8-12 16:55:18 | 显示全部楼层
暮色恭喜发财 发表于 2015-8-7 14:01
现在的主要问题是弄清楚是PEG多少好,还有就是在哪个缓冲液中好,还有就是PH值 ...

楼主实验进行的怎么样,是否理想,请分享下……
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发表于 2015-8-14 10:12:58 | 显示全部楼层
暮色恭喜发财 发表于 2015-8-13 11:23
现在还在摸索条件,主要是抽提出来不好检测,沉淀是有的,看表型还可以 ...

不好检测是什么意思?有表型是指在扫描电镜下看得到exosome吗?
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