求助如何用FM1-43标记exo

hereissyk · 发表于 2016-9-5 23:05:19

在文献中看到大牛用FM1-43标记exo，貌似是打入体内做组织切片电镜下观察的，不知道是否有哪位大侠做过相关实验，求指点，谢谢！

baishixiaoyaozi · 发表于 2016-9-6 22:06:48

我用FM1－43标记的EVs处理过细胞。如果你想做体内实验的话，最好用FM1－43FX，可以PFA固定后再用荧光显微镜观察。

hereissyk · 发表于 2016-9-7 16:31:35

baishixiaoyaozi 发表于 2016-9-6 22:06
我用FM1－43标记的EVs处理过细胞。如果你想做体内实验的话，最好用FM1－43FX，可以PFA固定后再用荧光显微镜 ...

我想做电镜观察体内exosomes具体沉积于什么位置，这个具体没涉猎过，还烦请明示FM1-43FX这个后缀FX代表什么，PFA固定具体是什么，或者是否有文献可供参考，不胜感谢！
邮箱hereissyk@hotmail.com 我是浙大肿瘤研究所

baishixiaoyaozi · 发表于 2016-9-7 21:34:02

hereissyk 发表于 2016-9-7 16:31
我想做电镜观察体内exosomes具体沉积于什么位置，这个具体没涉猎过，还烦请明示FM1-43FX这个后缀FX代表什 ...

校友你好。如果想用电镜观察体内exosomes，不适合使用FM系列荧光染料，应该用胶体金免疫电镜技术。
FX表示Fix，PFA是多聚甲醛polyformaldehyde。

hereissyk · 发表于 2016-9-7 23:46:41

baishixiaoyaozi 发表于 2016-9-7 21:34
校友你好。如果想用电镜观察体内exosomes，不适合使用FM系列荧光染料，应该用胶体金免疫电镜技术。
FX表 ...

我是在一篇文献（请见下一回复）中看到他们用的这个方法才提的，我自己搜了也的确是跟你说的一样，但这篇文献中就是用FM1-43做的，免疫电镜浙大貌似不常规开展，我想过两天去电镜老师那再问问。
校友现在还在浙大吗，如果可以我们交流一下？

hereissyk · 发表于 2016-9-7 23:47:07

参考文献

baishixiaoyaozi · 发表于 2016-9-8 00:20:12

文献已读。看起来作者根据复染后颜色深浅不同来区分内源exosomes以及被FM1－43FX标记的exosomes。
对你的课题不了解，不过我不建议一开始就用电镜来观察exosomes，尤其是研究其组织定位，除非之前做过非常多的电镜实验，而且对不同的亚细胞结构非常熟悉。你可以尝试着先用荧光显微镜观察FM1－43标记的exosomes，步骤会比较简单，而且con－focol显微镜还是比较常见的，core facility应该有的。
我毕业好久了，我们可以通过这个论坛交流，祝实验顺利。

hereissyk · 发表于 2016-9-8 17:54:18

baishixiaoyaozi 发表于 2016-9-8 00:20
文献已读。看起来作者根据复染后颜色深浅不同来区分内源exosomes以及被FM1－43FX标记的exosomes。
对你的课 ...

其实荧光的那块我已经做好了。。用PKH染料做的，效果还不错，所以想试试电镜

hereissyk · 发表于 2016-9-8 17:56:09

baishixiaoyaozi 发表于 2016-9-8 00:20
文献已读。看起来作者根据复染后颜色深浅不同来区分内源exosomes以及被FM1－43FX标记的exosomes。
对你的课 ...

其实荧光的那块我已经做好了。。用PKH染料做的，效果还不错，所以想试试电镜

baishixiaoyaozi · 发表于 2016-9-8 21:28:26

如果有不错的前期数据，不妨试试电镜。有几个问题想请教一下，你们实验室怎么定量exosomes，BCA法还是nano particle tracking system？PKH染料标记exosomes后处理细胞，非特异性背景荧光强吗？

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