进行体外实验时，外加外泌体是否会降低细胞存活率?

peggy4598690 · 发表于 2018-7-20 01:25:09

请问各位在进行体外实验时，外加exosome到细胞之中是否具有毒性???

我是分别收集control组(只有从含有FBS的培养液，换成Exosome-depleted FBS配置成的培养液)的上清液以及加药组的上清液去进行超高速离心后，最后的pellet用100微升的PBS重悬。

但是我做了MTT测试之后发现，Control组收集出来的Exosome，和没有加exosome的组别相比，存活率显著下降!!

我查询了各种文献，但好像没有人提出正常情况下分离出的exosome具有细胞毒性，因此我想请问是否有人遇到跟我相同的问题? 谢谢。

P.S. 我是使用RINm5f cell line(islet beta cell line)

dlwlrma · 发表于 2018-7-20 09:53:07

很巧额。我做过正常细胞和一个癌细胞的胞外囊泡，无论是作用正常细胞还是癌细胞都是MTT显著抑制增殖。觉得解释不通就没有做了。

提取方法和你的一致。

peggy4598690 · 发表于 2018-7-23 10:55:49

Johnny 发表于 2018-7-20 17:52
外泌体不纯

您好，想请问如果外泌体不纯会导致细胞存活率下降吗? 有没有相关的文献，感激不尽!!!

peggy4598690 · 发表于 2018-7-23 10:56:50

dlwlrma 发表于 2018-7-20 09:53
很巧额。我做过正常细胞和一个癌细胞的胞外囊泡，无论是作用正常细胞还是癌细胞都是MTT显著抑制增殖。觉得 ...

您好，我也是觉得很难解释，请问后来您是直接舍弃外泌体的题目吗?谢谢您!!!

ERIC · 发表于 2018-7-23 19:47:44

我觉得是:外泌体量大了导致细胞死掉的，外泌体里面含有N多热休克蛋白什么的，而且就算是细胞与细胞共培养很多时候也会影响到细胞的本身实验体系，该增殖的不增殖。

peggy4598690 · 发表于 2018-7-24 11:30:23

ERIC 发表于 2018-7-23 19:47
我觉得是:外泌体量大了导致细胞死掉的，外泌体里面含有N多热休克蛋白什么的，而且就算是细胞与细胞共培养很 ...

您好，感谢您的回覆，我也觉得可能是浓度问题，但是我的外泌体是加10微升/mL，有很多文献也是做此浓度，但似乎没有明显影响，所以我才觉得很怪，如果降低外泌体的量，会不会就没什么效果了啊?@@

ERIC · 发表于 2018-7-29 22:18:29

peggy4598690 发表于 2018-7-24 11:30
您好，感谢您的回覆，我也觉得可能是浓度问题，但是我的外泌体是加10微升/mL，有很多文献也是做此浓度， ...

浓度10ug/ml的问题应该不大，从你的实验描述上看，添加Control的外泌体难道有抑制作用很奇怪吗？一个没加，一个加了外泌体

peggy4598690 · 发表于 2018-7-30 13:34:04

ERIC 发表于 2018-7-29 22:18
浓度10ug/ml的问题应该不大，从你的实验描述上看，添加Control的外泌体难道有抑制作用很奇怪吗？一个没加 ...

我会觉得奇怪是因为如果添加Control的外泌体就会让细胞存活率下降，这样不是就代表说身体的细胞在正常情况下就会一直释放出具有毒性的外泌体来毒杀自己的细胞吗?? 如果是这样的话那真的是个大发现!!! 不过我看其他文献似乎都没有这样的结果???所以我才想问问版上的各位

ERIC · 发表于 2018-8-19 18:23:39

peggy4598690 发表于 2018-7-30 13:34
我会觉得奇怪是因为如果添加Control的外泌体就会让细胞存活率下降，这样不是就代表说身体的细胞在正常情 ...

嗯，我记得有人做autophagosomes 的，提取方法和外泌体差不多，囊泡里面混一点我觉得也有可能。

ZHUBIN · 发表于 2023-3-14 14:30:57

外泌体提取不纯导致的，凋亡小体会导致细胞的死亡

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进行体外实验时，外加外泌体是否会降低细胞存活率?

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