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外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用 »外泌体-小膜泡大作用！ › 外泌体研究方法 › 分离纯化 › 新生提取EC外泌体方法求助

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新生提取EC外泌体方法求助

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楼主

发表于 2021-5-16 21:19:20 | 只看该作者回帖奖励

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科研小白，老师从零开始涉及外泌体领域目前是无FBS培养基培养48h后，收集50mL细胞培养上清，3000g*15min，过PES的0.22滤头，100kDa密理博离心管超滤浓缩后，11wg*70min超离两次，400μLPBS重悬，
BCA浓度测下来是0.25μg/μL，NTA是5*10E8，但是TEM拍出来exo量非常少，
想问问是不是我提取的方法不对？？
同时也用了QIAGEN的Exo easy kit ，超滤浓缩之后用试剂盒提取，最后用400μL重悬，发现蛋白浓度时0.4μg/μL，但是TEM也很难找到外泌体
求各位大神支招！十分感谢！

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楼主| 发表于 2021-8-25 17:23:27 | 只看该作者

有人吗，求助啊

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楼主| 发表于 2021-5-18 20:19:46 | 只看该作者

有人吗~~~~

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地板

发表于 2021-5-18 23:29:44 | 只看该作者

我只能帮楼主顶一下

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5^#

发表于 2021-5-20 13:21:11 | 只看该作者

超离的电镜图里疑似结构挺多的。电压小了吧？
另外，最好不要浓缩，直接超，超离后PBS洗涤再超一遍。

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6^#

发表于 2021-5-20 13:21:57 | 只看该作者

50ML培液超离后用400ul重悬。 BCA 0.25 结果属于正常范围。

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7^#

楼主| 发表于 2021-8-9 21:15:23 | 只看该作者

hzangs 发表于 2021-5-20 13:21
超离的电镜图里疑似结构挺多的。电压小了吧？
另外，最好不要浓缩，直接超，超离后PBS洗涤再超一遍。 ...

这个是用120kV拍，醋酸双氧铀负染

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8^#

楼主| 发表于 2021-8-9 21:16:47 | 只看该作者

hzangs 发表于 2021-5-20 13:21
50ML培液超离后用400ul重悬。 BCA 0.25 结果属于正常范围。

我后面又做了一次，120mL只提取出来0.6mg/ml，感觉产量太低了，会不会是我100kda的超滤管不行啊

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那时候的我

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9^#

发表于 2021-10-28 10:25:57 | 只看该作者

帮助楼主顶一下

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10^#

发表于 2022-10-19 10:41:09 | 只看该作者

我们实验室也在做外泌体用磁珠法试剂盒，你这种的电镜照片还真是没见过，电镜照片我们都是找公司拍，能看到外泌体，NTA大概1.0*10的9次方，蛋白浓度0.5mg/ml左右。

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