血清exosome蛋白SDS-PAGE电泳结果求助

丝瓜 · 发表于 2016-7-4 16:34:45

超离+蔗糖垫提取血清exosome后电泳考马斯亮蓝后的结果~~

有专业人士帮忙分析下么？~
红笔圈出的这一条亮亮的这个很难说是什么呀，这样的图怎么判断外泌体的蛋白纯度呢？

微泡biomarker · 发表于 2016-7-4 21:04:21

我也做血清但是和你的图差别好大，我们为了减少上样量都用银染，如果你的marker 是在 Alb or igG 那有可能就是呢。

丝瓜 · 发表于 2016-7-4 21:39:24

Johnny 发表于 2016-7-4 18:23
需要抗体杂一下几个exosome marker

经典的maker都没什么问题~~可是不知道这个纯度怎么样

丝瓜 · 发表于 2016-7-4 21:41:02

微泡biomarker 发表于 2016-7-4 21:04
我也做血清但是和你的图差别好大，我们为了减少上样量都用银染，如果你的marker 是在 Alb or igG 那有可能 ...

是嘛？我做了几遍，红线部分一直都是比较浓的。看过ALb和IGg的分子量都不是那个位置。不知道你有没有做过某些所谓的阴性蛋白，就是说exosome没有得maker，跑出来就说明不纯的那些。不过血清的和细胞的有可比性么？

wjy · 发表于 2016-7-24 15:14:49

你红线部分的分子量多大，要是70KD可能是血清的白蛋白。

丝瓜 · 发表于 2016-7-25 21:52:53

wjy 发表于 2016-7-24 15:14
你红线部分的分子量多大，要是70KD可能是血清的白蛋白。

红线是70，上面那条是100.应该是70-100之间的，我跑过血清的，白蛋白的位置跟这个也不一样~~
现在已经把那块抠出来打质谱鉴定了，等鉴定结果

wjy · 发表于 2016-7-26 14:44:59

丝瓜发表于 2016-7-25 21:52
红线是70，上面那条是100.应该是70-100之间的，我跑过血清的，白蛋白的位置跟这个也不一样~~
现在已经把 ...

哇这么轻易就可以打质谱啊？能弱弱的问一句，你们是自己实验室有质谱还是拿去外面测质谱

子非鱼 · 发表于 2016-7-26 15:19:19

我是想问，血清exosome跑出来都是这么几条带吗？还是说这几条带其实是血清里的高丰度蛋白没清洗干净遗留下来的啊？也做这方面，困惑ing.....
微泡，你跑出来血清exosome是什么样子的？

子非鱼 · 发表于 2016-7-26 15:21:18

微泡biomarker 发表于 2016-7-4 21:04
我也做血清但是和你的图差别好大，我们为了减少上样量都用银染，如果你的marker 是在 Alb or igG 那有可能 ...

微泡，你跑出来血清exosome是什么样子的？方不方便看看微泡的考染图或银染图图啊？

18940258208 · 发表于 2017-5-30 16:14:32

求助！关于exosome蛋白的western blot，我做的是CD63的鉴定，用的是Qiagen厂家的exoEasy Maxi kit试剂盒提取的细胞上清15ml的外泌体（共6个不同时间点的样本），最后溶于500ul XE buffer。前后一共做了6次WB，起初是没有用裂解液，配的10%胶，直接取20ul加相应的loading buffer，100度变性后上样，然后出来的条带是连续一条直线，之后改了各种试剂及条件，仍是一条线，我怕是自己的技术问题，同时期同条件下还跑了以前剩余的普通蛋白标本，杂的是GAPDH，跑出来的泳道间隔都没问题，证实我的技术还行。于是在最后一次加了裂解液（MPER+PMSF）后，显影竟然是白板，Oh MY GOD，我想死的心都有了。也翻阅了好多文献，但是都不是说的很具体详细。寻寻觅觅终于找到组织了，求助各位大神

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