超速离心后，PBS洗多少次比较合适？

北燕南飞 · 发表于 2017-4-18 16:19:13

采用经典protocol方法（PBS清洗一次）对细胞培养液中外泌体进行提取时，电镜做出来背景非常脏
大家一般清洗几次，多次清洗会不会导致外泌体破裂？

栾珍珠 · 发表于 2017-6-22 16:10:02

hzangs 发表于 2017-6-20 13:07
底部留一点液体不吸走。 PBS洗后用底部剩余的PBS 重悬

亲，离心后重悬的pbs量太少，实验室超离的管子根本不配套，请问你是怎么做的呀？

栾珍珠 · 发表于 2017-6-22 16:08:08

步步唧唧发表于 2017-5-9 19:31
问一下每次提取要多少癌细胞上清？我一般用30--40ml，最后提出来也就一点儿，200ul重悬，觉得量太少，实 ...

同问啊！！！！！！！！！！

meiling · 发表于 2017-6-20 16:20:31

北燕南飞发表于 2017-4-24 14:54
300g 10min，取上清；2,000g 10min，取上清； 10,000g 30min，取上清； 100,000g 70 min，取沉淀；加PBS ...

请问300g离心十分钟这一步可以省吗？因为离心后也看不到沉淀

步步唧唧 · 发表于 2017-6-20 14:56:34

meiling 发表于 2017-6-20 11:05
能不能把细胞培养上清取出来，先放-20度冰箱，多积累一些再用呢？

不知道哎！-20没试过。4度倒是试过还可以提出来

hzangs · 发表于 2017-6-20 13:07:39

meiling 发表于 2017-6-20 11:10
那请问你用PBS清洗的话，如果沉淀很少，看不到的话，如何操作才能不把沉淀吸走？求技巧 ...

底部留一点液体不吸走。 PBS洗后用底部剩余的PBS 重悬

meiling · 发表于 2017-6-20 11:13:03

请问你是送公司做电镜的吗？哪个公司？价格是多少呀？

meiling · 发表于 2017-6-20 11:10:42

hzangs 发表于 2017-5-9 17:49
可以的。非常少非常小的沉淀。不容易发现

那请问你用PBS清洗的话，如果沉淀很少，看不到的话，如何操作才能不把沉淀吸走？求技巧

meiling · 发表于 2017-6-20 11:05:11

步步唧唧发表于 2017-5-9 19:31
问一下每次提取要多少癌细胞上清？我一般用30--40ml，最后提出来也就一点儿，200ul重悬，觉得量太少，实 ...

能不能把细胞培养上清取出来，先放-20度冰箱，多积累一些再用呢？

弹珠1253 · 发表于 2017-5-15 20:59:25

北燕南飞发表于 2017-5-15 20:53
我之前没有滤过，不过如果需要滤的话，应该在超离前

好的感谢！看到一个protocol就是在12000之后超离之前过滤，就按那个做了

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