菜鸟求助 细胞培养上清SBI 试剂外泌体分离

muzi.csu

用SBI公司的Exoquick-TC分离肿瘤细胞培养上清中的外泌体。刚开始用无血清培基培养肿瘤细胞，48小时后收集上清（5ml），加入试剂过夜后离心未发现沉淀。后来用10%的普通胎牛血清培养细胞，离心后沉淀较多。但是因为胎牛血清中含有胎牛的外泌体，所以后来又换成了SBI公司的EXO-free的血清10%培养细胞，48小时候收集上清，离心却又未见沉淀。而文献报道该肿瘤细胞可分泌大量外泌体，但是不知道为什么我分离不出来...  麻烦各位大神指教啊，不胜感激

muzi.csu

Johnny 发表于 2015-1-24 19:11
你好，5ml的上清量太少。建议加大上清量。
另外，请问SBI公司的EXO-free的血清是从哪儿买的？ ...

谢谢，我加大上清再试试！
EXO-free的血清是买的SBI公司的，不过SBI好像没有专门的代理商，所以随便找的试剂商（青木公司）买的。

ffp1988

注意细胞的量，细胞太少也不行

muzi.csu

ffp1988 发表于 2015-1-25 19:31
注意细胞的量，细胞太少也不行

好的，非常感谢

muzi.csu

我又用10ml和15ml的细胞培养上清分别做了一次（3×106个细胞培养48小时），但是离心后还是看不见沉，请问有谁知道是怎么回事么,请大家不吝指教啊...

muzi.csu

Johnny 发表于 2015-1-31 16:58
有可能还是太少，你的细胞分泌的exo量少

好忧伤...我再加大量还有换个细胞系试试  谢谢了

丁倩倩

muzi.csu 发表于 2015-1-31 15:26
我又用10ml和15ml的细胞培养上清分别做了一次（3×106个细胞培养48小时），但是离心后还是看不见沉，请问有 ...

看不到沉淀不代表没有吧，可能比较少，我之前用过一次SBI的提取试剂盒也没看到沉淀，但你需要继续往下做鉴定才能确定到底有没有

muzi.csu

丁倩倩 发表于 2015-2-5 18:46
看不到沉淀不代表没有吧，可能比较少，我之前用过一次SBI的提取试剂盒也没看到沉淀，但你需要继续往下做 ...

( ⊙ o ⊙ ) 这样啊，我之前没看到沉淀的以为没有就都没管了......非常感谢

yy8651

细胞培养诸位都是用什么容器？

effiezhang66

求问用EXO-quick, 为什么过夜后对离心的要求这么低啊，1500g就可以了？还有提完了如果想浓缩，各位大神都怎么操作啊，谢谢啦