超离提取exo底部沉淀问题

stones · 发表于 2016-8-11 20:27:16

本帖最后由 stones 于 2016-8-11 20:29 编辑

210ml的MSC无血清培养上清，第一次离心的时候没有看到沉淀，最后用100ulPBS重悬，BCA测浓度在20ug/ml左右。接着又超离了210ml的上清，这次看到了沉淀，在离心管底部一圈白色的沉淀，最后用PBS重悬，不好溶，贴的很紧，最后用250ul的PBS连刮带吹打了50+次，转移到EP管内；浓度待测。请教各位，这个沉淀是不是exosomes？我这个浓度是不是太低了。

KKruru · 发表于 2021-11-11 16:20:28

Kaku 发表于 2019-3-31 10:48
借楼问下版主。我也是干细胞来源的无血清培养基。有的时候会遇到这种黏黏的东西聚集在底部，越吹越粘，有 ...

同问，求解

iiiiiisuur · 发表于 2021-9-26 19:00:15

Kaku 发表于 2019-3-31 10:48
借楼问下版主。我也是干细胞来源的无血清培养基。有的时候会遇到这种黏黏的东西聚集在底部，越吹越粘，有 ...

我也遇到过这种，吹都吹不散，和朋友讨论有没有可能是DNA，但是也不敢用核酸酶处理，请问有知道怎么解决的吗？

talentsunkai · 发表于 2019-7-13 16:16:29

我是倒掉的 270ml培养液只有4ug，下次准备尝试吸，不知道需要留多少不吸？

xlyz · 发表于 2019-7-2 11:42:22

怎么测的浓度呀？

idealZHENG1991 · 发表于 2019-5-23 14:54:44

Kaku 发表于 2019-3-31 10:48
借楼问下版主。我也是干细胞来源的无血清培养基。有的时候会遇到这种黏黏的东西聚集在底部，越吹越粘，有 ...

层主我也遇到了你同样的问题，请问这种沉淀到底要不要，是不是外泌体？层主最后是怎么解决的呢

Kaku · 发表于 2019-3-31 10:48:11

hzangs 发表于 2016-9-12 16:38
有关系！

借楼问下版主。我也是干细胞来源的无血清培养基。有的时候会遇到这种黏黏的东西聚集在底部，越吹越粘，有时候用枪头一挑还拉丝，去nano drop测bca几乎就没有。这种情况时有时无，容易吹开的批次浓度能有4mg/ml。版主有没有在细胞培养条件上面的建议，如何避免这种粘稠物。谢谢。

gj417439623 · 发表于 2017-11-16 18:50:09

hzangs 发表于 2017-11-16 18:44
稀释倍数小了。你尝试一下10倍-20倍稀释，可以考虑过夜离心

好的，请教一下您。这个稀释的作用是什么啊？稀释倍数大一点，得率会更高么？

hzangs · 发表于 2017-11-16 18:44:20

gj417439623 发表于 2017-11-15 16:42
前辈，你好，我想请教一下。我用人血浆提外泌体，之前查的步骤说是要用pbs和血浆等体积混匀后进行离心， ...

稀释倍数小了。你尝试一下10倍-20倍稀释，可以考虑过夜离心

gj417439623 · 发表于 2017-11-15 16:42:37

hzangs 发表于 2016-8-17 10:05
MSC 我没有试过。但是按照johnny的说法他之前做MSC 感觉分泌量还不错

前辈，你好，我想请教一下。我用人血浆提外泌体，之前查的步骤说是要用pbs和血浆等体积混匀后进行离心，我今天用少量的血浆，3ml加了3mlpbs做了一下，最后没有可见沉淀。但我看好多文献里没有写稀释血浆的这一步，想请教一下，究竟要不要稀释呢？

lz93046 · 发表于 2017-11-2 16:11:41

量好少的感觉。

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