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新手 sbi试剂盒提取的内皮祖细胞外泌体的的相关问题

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发表于 2015-12-21 12:33:57 | 只看该作者 回帖奖励 |倒序浏览 |阅读模式
sbi试剂盒提取具体步骤:
1、内皮祖细胞培养液3000g离心15分钟,取上清。
2、0.22μm除菌滤器过滤。
3、培养液上清与提取试剂5:1,颠倒3次,静置12小时。
4、1500g离心30分钟,吸除上清。1500g,离心5分钟,进一步去除残余上清。
5、PBS重悬,-80℃保存。

问题一:培养细胞用的血清,120000g离心150分钟,离心以后看不到沉淀,不知是否可行?
问题二:沉淀以后,可见大量白色沉淀,是否有可能来源于培养液中的血清?
问题三:试剂盒提取的外泌体做功能试验,受到质疑的几率有多大?
问题四:提取过程有什么问题,哪里需要改正?

新手,大神受累指教!
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沙发
 楼主| 发表于 2015-12-21 12:41:27 | 只看该作者
补充:血清是beckman的离心机120000g离心,因为超离管是敞口的,所以离完之后为防止污染,用前0.22μm除菌滤器过滤。
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板凳
发表于 2015-12-23 14:27:53 | 只看该作者
我觉得你提的问题都有道理,坛子里都或多或少讨论过,你可以浏览看看,特别是几个斑竹和炒鸡斑竹的帖子
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地板
发表于 2016-2-24 01:05:01 | 只看该作者
说是100nm的提不出来?
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 楼主| 发表于 2016-2-24 13:23:18 | 只看该作者
电镜下大小多在40——80nm
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发表于 2016-3-26 09:21:39 | 只看该作者
我用101bio kit提取的胶质瘤细胞的exo size也是在40nm到80nm左右。不知道到底是不是
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 楼主| 发表于 2016-3-27 12:14:19 | 只看该作者
spencerliu 发表于 2016-3-26 09:21
我用101bio kit提取的胶质瘤细胞的exo size也是在40nm到80nm左右。不知道到底是不是 ...

WB、电镜验证下
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