western条带很乱大家帮我找找茬儿~

大琳宝儿 · 发表于 2015-5-12 10:37:42

用SBI试剂盒提取0.259g心脏，半个大脑脑， 500ul血清里的exosome，沉淀之后，分别向每个管中加100ul裂解液（ripa：10%SDS

I=3：2：0.01）,超声溶解静置30min，13500rpm30min离心，BCA测浓度，分别为0.26 0.39 0.49左右，处理western样品（loading等），煮样100度6min，分别10ug 30ug 50ug，20ug定量，12%丙烯酰胺SDS跑胶结果如图~大家帮我看看：
1：为啥血清那三道杂蛋白那么多啊
2：CD9跑出来了，但是CD63 TSG101好像没有啊
2：过程有啥问题不？

大琳宝儿 · 发表于 2015-5-12 14:43:17

Johnny 发表于 2015-5-12 11:22
好乱。。。

然后呢？嘿嘿你们跑的时候不是这样的？艾玛愁死了好不顺利

惜名 · 发表于 2015-5-12 14:53:06

艾玛

hzangs · 发表于 2015-5-13 12:50:56

亲放弃吧就算找出来，这样的图也没办法在paper里show啊……

大琳宝儿 · 发表于 2015-5-13 16:35:40

hzangs 发表于 2015-5-13 12:50
亲放弃吧就算找出来，这样的图也没办法在paper里show啊……

怎么能放弃呢我把过程写出来大家挑挑错我再改进一下实验应该能能出来吧，嘿嘿我才第一次跑，嘿嘿不灰心~

hzangs · 发表于 2015-5-13 17:39:22

大琳宝儿发表于 2015-5-13 16:35
怎么能放弃呢我把过程写出来大家挑挑错我再改进一下实验应该能能出来吧，嘿嘿我才第一次跑，嘿嘿不灰 ...

美丽的姑娘，我意思是说应该考虑换抗体试试，你这杂出来的东西太乱了，不好秀图的~

大琳宝儿 · 发表于 2015-5-13 17:56:10

hzangs 发表于 2015-5-13 17:39
美丽的姑娘，我意思是说应该考虑换抗体试试，你这杂出来的东西太乱了，不好秀图的~ ...

都是abcam的，嘿嘿~我觉得我的问题可能比抗体问题大，我再研究研究~嘿嘿，谢谢

落叶知秋 · 发表于 2015-5-19 12:41:05

你抗体时单抗还是多抗？是否是抗体非特异性比较大，CST官网有详细的wb过程。

evomicscience · 发表于 2015-6-1 06:27:05

All of your experiments are correct! PEG based exosome isolation kit will co-pellet tons of hydrophobic proteins and HDL/LDL nanoparticles etc in serum or plasma. All parts will stick each other and it will be difficult to suspend. If you apply your sample serum or others to column based isolation kit, your result will be totally different! Contact me if you need further information : info@evomicscience.com
Best,
John

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