菜鸟求助 细胞培养上清SBI 试剂外泌体分离

freeman811

我是这样操作的：4℃, 3000g×15min,去除细胞及碎片；然后将上清移入Amicon-Ultra-15超滤管（Millipore公司），4℃，4000g×30min；吸取内网中200ul超滤液，再加入等体积exoquick提取液，混匀后放置过夜，离心后会有大量沉淀。

yy8651

freeman811 发表于 2015-6-22 23:25
我是这样操作的：4℃, 3000g×15min,去除细胞及碎片；然后将上清移入Amicon-Ultra-15超滤管（Millipore公司 ...

你的超滤管是多大的？100KD？
超滤30min不会把所有液体都滤掉吗？
你没有按照说明书的比例，而是按照1:1的比例加的提取试剂是吗？
谢谢

freeman811

yy8651 发表于 2015-6-23 09:53
你的超滤管是多大的？100KD？
超滤30min不会把所有液体都滤掉吗？
你没有按照说明书的比例，而是按照1:1 ...

超滤管是30KD，只要没有滤膜破损，超滤管具有残液保留功能，保证最终滤液的量在200ul左右，不会都滤掉。
超滤液是按照等比例加提取液，一是文献中也这么做；二是我也试过按照5：1加提取液，沉淀没有1：1的多，而且5：1去提取的exosome用Nono系统测量的粒径平均在500-600nm左右，且较为分散，感觉5：1不能完全提取。但1：1提取的我也没测过。供参考！

梦想照进现实

宝莲 发表于 2015-4-23 19:18
我用life的试剂盒，20ml无血清的细胞培养上清提取也没有沉淀，做电镜可以看到少量外泌体。 ...

你好，最近准备用life的kit提取细胞培养上清，请问建议用多少上清呀？

iiibuick

我想请问一下，我也买的SBI的试剂盒，还没开始用，看了说明书有一些不是很清楚的地方，在最后加buffer那步是跟具体的后续操作有关系的，但说明书里主要就是针对RNA extraction 和protein extraction，我如果只是想要提取exosome，后面再标记蛋白，那是不是直接加PBS buffer就可以了？

weaver

iiibuick 发表于 2015-9-9 08:52
我想请问一下，我也买的SBI的试剂盒，还没开始用，看了说明书有一些不是很清楚的地方，在最后加buffer那步 ...

我想问问大家买的什么公司的SBI 试剂盒？哪家的比较好 能不能拍张说明书的图片呢？

子非鱼

weaver 发表于 2015-10-30 19:33
我想问问大家买的什么公司的SBI 试剂盒？哪家的比较好 能不能拍张说明书的图片呢？ ...

我买的是吉泰生物科技有限公司的，你现在做的怎么样了，SBI试剂盒到底怎么样啊，真是森森的忐忑...

七七溪

freeman811 发表于 2015-6-24 23:22
超滤管是30KD，只要没有滤膜破损，超滤管具有残液保留功能，保证最终滤液的量在200ul左右，不会都滤掉。
...

请问1:1这个kit用的是SBI的吗？

ashey

梦想照进现实 发表于 2015-7-13 09:08
你好，最近准备用life的kit提取细胞培养上清，请问建议用多少上清呀？

同问，细胞培养上清需要超滤浓缩吗？用了10ml培养上清也没有肉眼可见的沉淀啊。。。

cherry

加大到50ml 看看呢？一般看文献是间隔24小时收上清呢