科研小白请教：尿液中的exosome其来源都有？

evomicscience · 发表于 2015-10-26 14:19:12

赞赞！多谢你的回复。但也要考虑到半透膜浓缩尿液可能降低尿exosome收率。1.疏水的exosome粘在膜上，不容易回收，2.尿蛋白THP可能会网住一些exosome,3. 还可能有成本，耗时问题。尿液exosome很有前途，大家现在还没认识到。

咏咩咩 · 发表于 2015-11-1 17:43:33

evomicscience 发表于 2015-6-3 09:59
尿液最主要的问题是THP蛋白，量太大，网住了大量的Exosome，DTT和CHAPS处理绝对影响細胞和E×osome的完整性 ...

有兴趣~我在做尿液EV。想问下提了囊泡做WB看标志物前测蛋白浓度要不要加裂解液呢？有没有具体的步骤？谢谢~~

丝瓜 · 发表于 2015-11-1 20:17:40

hzangs 发表于 2015-10-26 11:20
SEC的柱子，我尝试过含血清培液浓缩50倍上样，分离结果也不错

上次您是浓缩了50倍上样的，有没有试过浓缩倍数更高的？会不会造成较大的损耗？

丝瓜 · 发表于 2015-11-1 20:18:03

hzangs 发表于 2015-10-26 11:20
SEC的柱子，我尝试过含血清培液浓缩50倍上样，分离结果也不错

上次您是浓缩了50倍上样的，有没有试过浓缩倍数更高的？会不会造成较大的损耗？

hzangs · 发表于 2015-11-1 20:21:53

丝瓜发表于 2015-11-1 20:18
上次您是浓缩了50倍上样的，有没有试过浓缩倍数更高的？会不会造成较大的损耗？ ...

我使用qEV的凝胶排阻柱子做的试用。样品为还exosomes-free FBS的细胞培养上清液。 50倍是我尝试的最高浓缩倍数了。没有再高的尝试。
没有做过尿液的，不知道会怎么样。
50倍浓缩结果看，凝胶排阻柱子分离和超速离心分离的收率差不多，不存在太大损耗。尿液你可以自己尝试一下~

会飞的盈盈 · 发表于 2016-1-31 12:38:45

evomicscience 发表于 2015-6-3 09:59
尿液最主要的问题是THP蛋白，量太大，网住了大量的Exosome，DTT和CHAPS处理绝对影响細胞和E×osome的完整性 ...

我也做尿液方面，能不能留个联系方式

Mxiansheng · 发表于 2016-2-16 16:49:27

evomicscience 发表于 2015-6-3 09:59
尿液最主要的问题是THP蛋白，量太大，网住了大量的Exosome，DTT和CHAPS处理绝对影响細胞和E×osome的完整性 ...

如何消除THP蛋白呢

evomicscience · 发表于 2016-2-22 08:27:45

会飞的盈盈发表于 2016-1-31 12:38
我也做尿液方面，能不能留个联系方式

咏咩咩 · 发表于 2016-2-23 11:01:35

Mxiansheng 发表于 2016-2-16 16:49
如何消除THP蛋白呢

很多是用DTT或者CHAPS的...看过一篇文献用胰酶的..

丫丫 · 发表于 2016-10-24 11:22:34

evomicscience 发表于 2015-6-3 09:59
尿液最主要的问题是THP蛋白，量太大，网住了大量的Exosome，DTT和CHAPS处理绝对影响細胞和E×osome的完整性 ...

您好，您说尿液中的Exosome含量太低，那一般从尿液中提的话要用多少体积呢？

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