外泌体蛋白提取

Lillian · 发表于 2017-8-22 09:11:04

请问下各大神，有人用RIPA（强）裂解液裂解外泌体的吗？你们裂解液的用量大概都是多少呀。。比如多少毫升培养液离心出来的外泌体，最后重悬后，多少体积的外泌体加多少体积的RIPA裂解液的？、？求指导！

baishixiaoyaozi · 发表于 2017-8-22 21:05:23

细胞：大鼠原代胶质细胞
培养基上清：120毫升差数离心后再超离
裂解液：100微升RIPA重悬外泌体
蛋白终浓度：0.5-0.8微克/微升

peggy4598690 · 发表于 2017-11-17 02:47:39

细胞：大鼠islet beta-cell (RINm5f)
培养基上清：40毫升差数离心后再超离
裂解液：50微升RIPA重悬外泌体
蛋白终浓度：0.13-0.15微克/微升

我的细胞长的极慢，所以才只收40毫升，如果有条件就多收几盘吧

诺不了 · 发表于 2019-9-16 22:05:56

baishixiaoyaozi 发表于 2017-8-22 21:05
细胞：大鼠原代胶质细胞
培养基上清：120毫升差数离心后再超离
裂解液：100微升RIPA重悬外泌体

请问你是怎么裂解的，具体条件是什么，有加蛋白酶抑制剂吗/

DBLB · 发表于 2019-10-20 15:17:19

baishixiaoyaozi 发表于 2017-8-22 21:05
细胞：大鼠原代胶质细胞
培养基上清：120毫升差数离心后再超离
裂解液：100微升RIPA重悬外泌体

您好，请问是直接用RIPA来重悬超离富集的外泌体对么。
RIPA的强中弱，对裂解效果有影响么。
请问你测得的浓度大概在什么范围。
我提取出来用PBS重悬了，NTA测得颗粒数为5E10个/ml左右。
1：1的比例加入了RIPA裂解，然后BCA测蛋白浓度。测不出来。请问应该如何调整

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