新手外泌体TEM结果

blackmail · 发表于 2020-1-3 16:55:46

各位老师和电镜大佬：
这是小弟超离后的电镜图，不知道是什么原因背景这么模糊，而且好像没有看到外泌体，但是粒径测出来平均在95nm左右，是不是电镜步骤有问题。电镜用的是2%的铀负染1min，120KV的电镜观察

hzangs · 发表于 2020-1-5 20:33:50

样本类型？预处理方法？超离参数？

blackmail · 发表于 2020-1-6 13:33:39

hzangs 发表于 2020-1-5 20:33
样本类型？预处理方法？超离参数？

版主您好，我的样本是NK-92细胞，密度在10*6/ml ，400ml上清 120000g离心70min，在用PBS洗2次，然后用400ul的PBS溶好冻在-80，第二天取10uL做电镜。我BCA测出来蛋白有1mg/ml，有没有可能是密度太大了？

圆圆 · 发表于 2020-1-8 13:51:37

第一，外泌体最后溶解的时候最好是用水溶解，不用PBS溶解。
第二，放在-20摄氏度保存一个月还是可以测的，-80℃不知道效果如何，从图中看是感觉浓度偏大了些，建议重新离一次外泌体，放在4度或者-20摄氏度保存一周内制备好样品

huanghaining · 发表于 2020-11-27 16:15:46

一般拍电镜图，起始量最好>10^6

tuo · 发表于 2022-11-16 19:44:04

你好，我最近拍的TEM也是这样，BCA测得浓度在2mg/ml，请问解决问题了吗

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