外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

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楼主: cherry
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外泌体提RNA浓度很低,qPCR循环数35左右,曲线良好,但觉...

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发表于 2016-8-17 09:34:57 | 只看该作者
grapetian 发表于 2016-7-11 19:31
你好 我想问你们是用什么提rna?我想提细胞培养上清外泌体的rna用哪个试剂盒比较好?还是直接提exosome后 ...

Qiagen那个也可以提细胞系的外泌体,我提过
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发表于 2016-11-14 16:06:00 | 只看该作者
楼主能分享一下是用什么方法富集的外泌体吗。
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发表于 2017-9-2 20:39:54 | 只看该作者
hzangs 发表于 2016-7-11 10:52
用10-20ul 水重悬, 浓度尽量保证在100ng/ul   
因为浓度低 所以260/280的值不是很正常,因此这个比值可以 ...

hzangs大神,看到您说用trizol提外泌体RNA效果还可以,想向您咨询请教一下。我是先用超离提外泌体,再用trizol提RNA,但RNA浓度一直很低,150ml细胞上清提外泌体,最后提取的rna用10ul 水溶解,用nanodrop测浓度在50ng/ul左右。很困惑,我的外泌体的提取也是按照经典的300g,10min;2000g,10min;10000g,30min;100000g,90min 两遍操作的,RNA的提取步骤大概如下:
1、向重悬得到的外泌体溶液(200ul)中加入1ml Trizol,反复吹打混匀,室温放置10min。
2、按比例加入氯仿200ul,剧烈涡旋振荡,4℃放置10min。
4、4℃ 12000g,离心15min。
5、小心吸取上层水相至新EP管(500ul-700ul)。
6、1:1加入异丙醇500ul-700ul,混匀,-20℃放置30min(想着低温、延长时间能增加rna富集)。
7、4℃ 12000g 离心10min,弃上清,RNA 沉于管底。
8、加入75%乙醇1ml,温和振荡。
9、4℃ 12000g 离心 5min,弃上清,晾干
10、加用10-20ul RNAse-free 水溶解沉淀RNA(室温),测浓度
麻烦啦
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发表于 2017-12-19 23:17:48 | 只看该作者
外泌体miRNA 你们内参用U6吗?
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发表于 2018-1-26 04:00:35 | 只看该作者
烟尽云淡 发表于 2017-9-2 20:39
hzangs大神,看到您说用trizol提外泌体RNA效果还可以,想向您咨询请教一下。我是先用超离提外泌体,再用t ...

请问你得到的RNA  A260/280是多少?
我用肿瘤细胞上清液提,约400ml,过程一样,Takara的RNaiso plus 提, 最后得到RNA为浓度100ng左右,有时候达到150ng,但是A260/A280一直都 是1.5左右。
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发表于 2018-2-13 16:38:57 来自手机 | 只看该作者
大神们,请问外泌体RNA的浓度能反应外泌体的浓度高低吗?
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发表于 2024-3-16 15:49:38 | 只看该作者
完颜云裳 发表于 2016-8-16 23:19
感谢楼主的分享,我们做的是病人血清,一管500ul。这样一来结果就能解释了。

请问你们ct值大概多少呀
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