关于血清外泌体的提取和鉴定（求使用101bioP101的同行联系）

木瓜31

做血清外泌体的战友，欢迎一起交流~加QQ 819743295
有刚好用101bio公司的P101提取血清外泌体的盆友吗？我已望眼欲穿！！！跑蛋白电泳虽已鉴定出CD63及TSG101，但位置很贴近，丽春红染色40~70kd附近一大团，像没跑开（如下图），跑了很多次都是这样，不知道是不是试剂中含高盐成分？

PS: 使用冷门产品，如果遇上售后支持服务不kind，简直就是虐心。。

seallin

惜名 发表于 2015-5-26 09:44
什么意思？
用kit提取exo怎么洗呢？

洗完一次，再加入大量PBS，把pellet吹散开，再加入1/2正常量的kit，再提取一次，这样BSA和TF就会少很多，如果样品和kit足够，建议再洗一次，如果是要做蛋白组学实验，三次清洗时起码的

yy8651

有知道的赶紧交流下，学习了

惜名

关于售后，不得不赞美一下SBI的唐慧。
声音温柔且不说，关键是技术很专业，搞不定的问题她还可以去问国外技术支持。。。

PS没用过101bio的P101

seallin

洗的次数太少，一看基本都是BSA和TF

惜名

seallin 发表于 2015-5-26 09:18
洗的次数太少，一看基本都是BSA和TF

什么意思？
用kit提取exo怎么洗呢？

木瓜31

seallin 发表于 2015-5-26 09:18
洗的次数太少，一看基本都是BSA和TF

谢谢你的意见~ 不过，还是不太明白，我提的是血清外泌体，不会有BSA吧??TF是指转铁蛋白（分子量80kd)，血清中含量有这么高吗？我只知道外泌体中有转铁蛋白受体，分子量84KD,含量会这么高吗？另外就是我用这个kit提到的外泌体就是外泌体重悬液（没有直接看到pellet这步），还是建议再用试剂提一次吗？其实我做核酸（不做蛋白），可能对杂蛋白要求没那么高，但是很困扰为什么这一大团蛋白跑不开？我显得CD63位置在这一团的下缘，Alix和Tsg101条带基本与这一团形状一致。。恳求意见和建议~

丁倩倩

我显得alix也是这样，不知道对不对

seallin

木瓜31 发表于 2015-5-29 10:02
谢谢你的意见~ 不过，还是不太明白，我提的是血清外泌体，不会有BSA吧??TF是指转铁蛋白（分子量80kd)，血 ...

有可能是洗的次数少，导致溶液中仍然有一些培养液残留，培养液中蛋白浓度是7mg/ml，而你提的那些外泌体顶多才几百微克，稍微残留点培养液，跑胶的时候就全是培养液的蛋白了，你的条带里BSA,TF和IgG的重链都是很有可能的。我超离的时候就是用PBS重新离了两次，最后结果还是有很多血清污染占大头。

wenzhouzsl

我也觉得SBI的唐慧 很不错，很专业，而且遇到新的问题她会及时反馈到国外的技术支持。
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