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本周hzangs在最新文献中选取了11篇分享给大家，其中7篇提供中文摘要。JEV近期的变化很是引人注目，发文速度得到了明显的提升，JEV的文章选择表现出相较其他杂志的独特性，他们更多的刊发方法学及技术方面的文章，同时兼顾功能性报道，相信未来是一个不错的囊泡领域专业杂志！本周推荐的第1篇值得我们关注，文章介绍了心源性细胞来源细胞外囊泡可靠的内参基因，这解决了qPCR内参基因选择的问题，虽然只是在心源性细胞外囊泡中使用，但它提供了一套内参基因选择的策略，值得我们关注；第2篇介绍了不同储存条件温度对囊泡的影响，这个是个很关键的问题，结论是囊泡最好现用现制，如何完好的保存囊泡是摆在大家面前亟待解决的问题；第3篇文章则介绍不同细胞来源囊泡的摄取效率可能存在差异；第4篇文章则介绍了微流控在细胞外囊泡分离纯化方面的应用，是一篇综述，值得大家关注。相关文章的原文hzangs会在本周末上传至论坛同名贴下，需要的可以到论坛下载。 1. A comprehensive method for identificationof suitable reference genes in extracellular vesicles.全面的使用多种方法学鉴定适合细胞外囊泡RT-qPCR分析的内参基因。 [J Extracell Vesicles] IF? PMID：28815002 摘要：逆转录定量聚合酶链反应（也就是我们平时说的RT-qPCR）是评估基因表达的最灵敏，经济和广泛使用的方法之一。然而，这种方法的效用一直受到包括使用适当参考基因的归一化等许多问题的质疑。细胞外囊泡（EV）生物学的兴起进一步强调了开发定制有效参考基因的急迫需求。 EV包含小RNA（包括microRNAs（miR））等独特标记。在本研究中，我们开发和验证了一种综合策略，用于在治疗相关的细胞类型——心源性细胞衍生的细胞外囊泡中鉴定高度稳定的参考基因。我们使用参考基因评估的四种主要方法分析数据：NormFinder，GeNorm，BestKeeper和Delta Ct。获得所有这些方法的加权几何平均值用于最终排名。 RNA测序分析鉴定了miR-101-3p，miR-23a-3p和以前鉴定的细胞外囊泡参考基因：miR-26a-5p。基于芯片的方法（NanoString）的分析鉴定了miR-23a，miR-217和miR-379作为稳定候选物。 RT-qPCR验证显示miR-23a-3p，miR-101-3p和miR-26a-5p的平均值是最稳定的归一化策略参考基因。在这里，我们证明使用多种算法的不同数据条件数据集综合分析得到了可靠稳定的参考基因，这将增加治疗相关细胞外囊泡基因表达评估的可靠性。 PS：qPCR相信是目前最为方便的检测RNA水平的方法，但是针对细胞外囊泡，目前依旧没有太好的内参基因，这篇文章则介绍了心源性细胞相关的细胞外囊泡可用的内参基因，非常值得大家关注。 2. Effects of storage temperature onairway exosome integrity for diagnostic and functional analyses.储存温度对呼吸道来源外泌体完整性及诊断和功能特性的影响。 [J Extracell Vesicles] IF? PMID：28819550 摘要：细胞外囊泡含有母细胞的细胞生物分子。为了对外泌体含量和功能进行可重复的研究，需要使储存条件对呼吸道来源外泌体完整性的影响最小。本文中，我们比较新鲜分离的气道外泌体的表面性质和蛋白质含量与冷藏或冷冻处理后的外泌体的差异。方法上我们通过差速超速离心纯化的小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）外泌体，立即检测或在+ 4°C或-80°C储存后再检测。通过动态光散射（DLS），透射电子显微镜（TEM）和电荷密度（ζ电位，ζ）评估外泌体结构。通过无标记的LC-MS / MS鉴定了外来蛋白质含量，包括泄漏/解离的蛋白质。最终我们发现新鲜分离的BALF外泌体具有95nm的平均直径和传统的特征形态。储存对BALF外泌体的大小和含量有显着影响。与新鲜相比，储存在+ 4℃的外泌体直径增加了10％，溶解后的样品存在分散聚集体并且ζ电位下降。在-80℃下的储存产生更大的影响，导致直径增加25％，ζ电位显著下降，并导致多层结构的形成。在新鲜的外泌体中，我们鉴定出了1140个处于19个不同基因集合（gene set）的蛋白。在室温下储存后，鉴定出848个蛋白质。在+ 4℃储存的样本中，与新鲜制备的外泌体洗涤上清相比，上清液部分出现224个蛋白质;这些蛋白质代表外泌体泄漏或与外泌体松散结合的“周外蛋白质”蛋白的解离。在-80℃储存的制剂中，上清液中出现194个蛋白质，表明不同的蛋白质在不同的储存温度下从外泌体中泄漏出来。因此，我们认为储存会导致BALF外泌体在形态特征和蛋白质含量方面的变化。为了保存外泌体蛋白质含量和代表性功能，我们应在分离后立即分析和使用气呼吸道来源外泌体。 PS：外泌体的保存一直是一个大家争论的问题。这篇文章以呼吸道来源的外泌体为研究对象，研究了不同保存温度对外泌体的影响，最终结果表明，目前最好的办法可能依旧是“外泌体要现用现制备！”。 3. Metastatic state of parent cellsinfluences the uptake and functionality of prostate cancer cell-derivedextracellular vesicles.转移灶来源的病人细胞释放的细胞外囊泡更容易被前列腺癌细胞和正常细胞摄取，同时更强烈的影响受体细胞的功能。 [J Extracell Vesicles] IF? PMID：28819549 摘要：细胞外囊泡（EVs）包括微囊泡和外泌体，他们能够介导细胞间信号传导，在癌症进展和转移发展中具有深远的作用。细胞外囊泡的内化可以促进受体细胞的功能变化，其性质取决于细胞外囊泡的分子组成和内容物。我们假设癌母细胞的转移阶段将决定相应的癌细胞衍生的EV的摄取效力和随后的功能效应。为了解决这个问题，我们比较了来自两个转移灶的前列腺癌细胞系（PC-3和LNCaP），人端粒酶逆转录酶永生化原发性恶性前列腺上皮细胞（RC92a / hTERT）和良性上皮前列腺细胞系（PNT2）。通过高含量显微镜，共焦显微镜和流式细胞术分析发现，与来自原发性恶性RC92a / hTERT细胞或良性PNT2细胞的细胞外囊泡相比，由PC-3/LNCaP细胞分离的细胞外囊泡能够被PC-3和LNCaP高效地内化。 细胞外囊泡的摄取也受细胞周期的影响，与G0 / G1或S期相比，在G2 / M期细胞中观察到更强的细胞外囊泡衍生的荧光信号。最后，在细胞外囊泡的受体细胞的功能上也观察到差异。与来自良性细胞或原代癌细胞相比，来自转移灶癌细胞的细胞外囊泡对PNT2细胞和PC-3细胞的增殖有明显的促进作用，而且PC-3细胞的迁移能力也被这些细胞外囊泡增强。 PS：这篇文章给大家提供了一个新的认识，即恶性程度更高的肿瘤来源的细胞外囊泡更容易被摄取，这可能暗示我们应当关注肿瘤的这一特性，它可能是潜在的肿瘤微环境治疗靶点！ 4. Microfluidics for exosome isolation andanalysis: enabling liquid biopsy for personalized medicine.微流控技术用于外泌体纯化及分析：使个性化医学液体活检成为可能。 [Lab Chip] IF=5.59 PMID：28832692 摘要：外泌体，能够包裹脂质，蛋白质，功能性信使RNA和微RNA及双链DNA的最小尺寸细胞外囊泡（∽30-150nm），目前它已经被证实是细胞间通讯的关键参与者。他们在体液中广泛存在，能够保护其携带的货物免受酶类降解，这一特性使其成为临床应用中十分具有吸引力的候选运载体，其具有很大的潜力成为创新型的诊断和治疗工具。但是临床应用中利用常规的分离和分析手段获取高纯度外泌体依旧具有挑战性，常规方法面临许多缺点，包括低产率和纯度，处理时间长，成本高，标准化困难。在本文中，我们回顾和总结了一个目前比较有希望的分离纯化解决方案即基于微流控技术的外泌体分析检测和分析，微流控方法可以讲大量样本的外泌体分离，检测和分析集成到一起，这有望推进基础研究和临床应用，同时也为基于外泌体的个性化医学液体活检铺平了道路。 PS：外泌体的分离和纯化分析方法是目前该领域亟待解决的问题，针对这一问题目前主要有沉淀、色谱和微流控三大原理为基础的不同分离方法。就目前的形式看，微流控依旧是未来最有可能应用于临床细胞外囊泡分离检测的手段，它能够将样品分离纯化及分析集成于一体，同时具有简单易操作、易标准化和易高通量化等特点，随着该技术在临床应用的铺开，其成本也会随着应用频率的提升而逐渐下降。Hzangs一直认为，着眼未来的外泌体临床应用，微流控分离分析方法较之沉淀和色谱具有不可替代的优势，值得我们关注。 5. Acute myeloid leukemia transforms thebone marrow niche into a leukemia-permissive microenvironment through exosomesecretion.急性髓性白血病细胞来源的外泌体能够改变骨髓“龛”结构，使其促进白血病发展并抑制正常造血过程。 [Leukemia] IF=12.10 PMID：28816238 摘要：关于白血病细胞如何改变骨髓（BM）的内部“龛”结构微环境以促进自身的生长和逃避化学疗法知之甚少。在这里，我们提供的数据表明，急性骨髓性白血病（AML）爆发能够通过外泌体的分泌将BM细胞重塑成支持白血病生长和抑制正常造血过程的骨髓微环境。移植AML细胞或AML衍生的外泌体能够增加间充质基质祖细胞数量，并阻断体内骨吸收发育及骨的形成。用AML衍生的外泌体预处理能够是实验动物产生加速AML生长的微环境。相反，通过靶向Rab27a（参与外泌体释放的重要调节因子）破坏AML细胞中外泌体的分泌，能够显著延缓了白血病的发展。在BM基质细胞中，AML衍生的外泌体能够诱导DKK1的表达，DKK1是正常造血和成骨的抑制因子，从而促成成骨细胞流失。相反，使用DKK1抑制剂治疗能够延迟AML进展并延长AML移植小鼠的生存期。此外，AML衍生的外泌体诱导BM基质细胞中造血干细胞支持因子（例如CXCL12，KITL和IGF1）的广泛下调，并降低其支持的正常造血功能。总之，本研究揭示了AML发病机理的新特征，揭示了AML细胞如何产生增强白血病细胞增殖和存活并抑制造血过程的自我强化白血病“龛”结构。 PS：外泌体在白血病过程中的促进作用。这一研究丰富了我们对白血病细胞自我促进的认识。是一篇不错的参考和学习文献。 6. Red blood cells release microparticlescontaining human argonaute 2 and miRNAs to target genes of Plasmodiumfalciparum.血红细胞释放微囊泡中包涵人ago2和miRNAs能够靶向恶性疟原虫。 [Emerg Microbes Infect] IF=5.61 PMID：28831191 摘要：红细胞（RBC）是疟疾寄生虫（疟原虫）感染后摄取营养的原料仓和作为逃避宿主免疫系统的避难所。最近的研究报道了疟疾患者循环系统中细胞外囊泡（微粒，MPs）含量的显著提升。然而，目前还不清楚这些细胞外囊泡是如何产生的，以及它们的生物学功能。在这项研究中，我们从正常的红细胞和疟原虫感染的红细胞（iRBC）的培养基中分离MP，比较其数量和来源，并通过深度测序分析其miRNA。我们发现在iRBCs培养基中分离得到的MP的数量要大于正常RBCs的培养基分离量。进一步研究表明，在这些MPs中，发现人类argonaute 2（hAgo2）与数百种miRNA结合。将这些hAgo2-miRNA复合物转移到寄生虫中，我们发现这些复合物能够通过与编码PfEMP1的基因家族var基因的A和B结合，miR-451/140下调基本疟疾抗原PfEMP1的表达。我们的数据表明，通过释放MPs，成熟的红细胞对疟疾感染具有天生的抵抗能力。这些研究还揭示了红细胞基因突变主要发生在疟疾流行地区的人群以及使用miRNA作为疟疾患者新药的可能性。 PS：国内研究者的一篇不错的文章。文章研究了疟原虫对红细胞细胞外囊泡的影响，并发现了红细胞对疟原虫的天生抗性，值得我们学习和了解一下。 7. C1-Inhibitor Decreases the Release ofVasculitis-Like Chemotactic Endothelial Microvesicles.C1抑制剂在血管炎病人中能都降低趋化性内皮细胞微粒的释放。 [J Am Soc Nephrol] IF=8.49 PMID：28289183 摘要：激肽系统在血管炎期间被激活并且可能有助于慢性炎症。 C1抑制剂是激肽系统的主要抑制剂。在这项研究中，我们研究了内皮细胞来源微囊泡上激肽B1受体的存在及其对炎症过程的促进作用。与对照组（n = 15）相比，通过流式细胞术分析鉴定发现，急性血管炎患者（n = 12）具有明显较高的循环系统内皮微泡水平，并且这些微泡显著的表现为激肽B1受体阳性（P <0.001） 。与来自正常细胞的微泡相比，衍生自受处理后的人胚胎肾细胞的B1受体阳性微泡显著诱导了嗜中性粒细胞的趋化作用，B1受体拮抗剂阻断了这种作用。同样，患者血浆能够诱导嗜中性粒细胞趋化性，通过降低微泡水平和通过阻断B1受体可以降低这一效果。我们使用灌注系统来研究患者血浆（n = 6）和对照血浆（n = 6）对肾小球内皮细胞释放微泡的影响。相比对照样品，患者样品明显诱导了更多的B1受体阳性内皮微泡的释放，通过减少灌注样品中的微泡能够消除这种作用。灌注C1抑制剂能够抑制病人血浆对肾小球内皮细胞B1受体阳性内皮微泡释放的促进作用。因此，B1受体阳性内皮微泡可能通过诱导嗜中性粒细胞趋化性而促进慢性炎症，探讨C1抑制剂对这些微泡的抑制作用从而降低嗜中性粒细胞诱发的炎症是潜在治疗方法。 PS：相对比较专业的研究性论文，介绍了内皮微粒对中性粒细胞的招募及对慢性炎症的影响。 8. Extracellular vesicles: Takingmetabolism on the road.细胞外囊泡：在传递的路上进行代谢过程。 [Nat Chem Biol] IF=12.71 PMID：28820875 PS：前些日子曾经在nature旗下子刊发布过一篇关于细胞外囊泡携带具有活性的代谢酶的相关报道。这是对该报道的一篇评论性文章，关注这一领域的朋友不妨读一读。 9. Exosomes Derived From Natural KillerCells Exert Therapeutic Effect in Melanoma.自然杀伤细胞来源的外泌体对黑色素瘤具有治疗作用。 [Theranostics] IF=8.85 PMID：28819459 PS：看题目就能知道这篇文章想说什么。专业领域内的朋友值得关注一下。 10. Glioblastoma stem-like cells secretethe pro-angiogenic VEGF-A factor in extracellular vesicles.胶质母细胞瘤干性样细胞释放细胞外囊泡包涵促进血管生成的VEGF-A因子。 [J Extracell Vesicles] IF? PMID：28815003 PS：JEV发表的一篇关于细胞外囊泡特定内容物的研究性论文，介绍了肿瘤细胞释放的细胞外囊泡携带VEGF-A因子并发挥功能。 11. Angiogenic Mechanisms of Human CD34+Stem Cell Exosomes in the Repair of Ischemic Hindlimb.人CD34阳性干细胞来源外泌体在缺血性下肢损伤修复中促血管生成的机制。 [Circ Res] IF=11.55 PMID：28298297 PS：缺血损伤修复过程中干细胞外泌体的作用机制，相关领域的朋友值得关注一下。 打赏专用二维码 hzangs建立了qq实名交流群，感兴趣的来哦~ 欢迎大家来这里聊聊天，交流交流课题。同时也可以试着解决个人问题
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|Archiver|手机版|外泌体之家 | exosomes & microvesicles
发表于 2017-8-28 10:13:28
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发表于 2017-8-28 11:06:00
