外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

 找回密码
 立即注册
查看: 1851|回复: 1
打印 上一主题 下一主题

急!这是我整理的细胞免疫荧光步骤,大神帮我看看

[复制链接]

28

主题

103

帖子

420

积分

中级会员

Rank: 3Rank: 3

积分
420
跳转到指定楼层
楼主
发表于 2017-12-22 11:59:17 | 只看该作者 回帖奖励 |倒序浏览 |阅读模式
细胞免疫荧光实验步骤,请大神帮忙看看有没有错的或需要注意的
1. 六孔板中将已爬好细胞的玻片预温好的PBS浸洗3次;
2. 4%的多聚甲醛4℃固定15minPBS浸洗玻片3次,每次5min
3. 0.2%Triton X-100( 4uL+4mLPBS )室温通透15min
4. PBS浸洗玻片3次,每次5min,吸水纸吸干PBS,在玻片上滴加封闭液(1%BSA in PBS + 0.05% Tween 20即0.1gBSA+10mLPBS+5uL Tween 20),室温封闭1h,封闭液浸没爬片;
5. 吸水纸吸掉封闭液,不洗,每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗β-actin(封闭液稀释至5 µg/ml,稀释浓度依据的说明书)并放入湿盒,4℃孵育过夜;
6. PBS浸洗爬片3次,每次5min,吸水纸吸干爬片上多余液体
7. 滴加稀释好的荧光二抗,FITC标记山羊抗小鼠IgG (H+L)稀释比例为1:500(用上述封闭液稀释),湿盒中37℃孵育1h
8. PBS浸洗3次,每次5min;注意:从加荧光二抗起,后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。
9. 用吸水纸吸干爬片上的液体,滴一滴(20-50μl) 抗荧光衰减封片剂(DAPI)于载玻片上,镊子小心夹起爬片,盖上贴有细胞的盖玻片,让细胞接触封片液,尽量避免气泡。 随后即可通过荧光显微镜观察样品。

回复

使用道具 举报

0

主题

55

帖子

728

积分

高级会员

Rank: 4

积分
728
沙发
发表于 2017-12-28 14:38:31 | 只看该作者
我染核也是用的封片,但是染出来的核颜色分布不均匀,大家有遇到过类似情况吗
回复 支持 反对

使用道具 举报

关闭

站长推荐上一条 /1 下一条

QQ|Archiver|手机版|外泌体之家 | exosomes & microvesicles  

GMT+8, 2024-11-1 10:24 , Processed in 0.189218 second(s), 24 queries .

Powered by Discuz! X3.3

© 2001-2017 Comsenz Inc.

快速回复 返回顶部 返回列表