本人使用life公司试剂盒提取血浆外泌体的RNA浓度

jianwen · 发表于 2016-3-10 00:39:58

400ml血浆分离出的外泌体，

1、往外泌体沉淀中加入1ml Trizol，混匀（反复吹打或涡旋），4℃放置10min。
2、按比例（1ml Trizol：200ul氯仿）加入氯仿200ul，剧烈振荡，4℃放置15min。
4、4℃ 12000×g离心15min。
5、吸取上层水相至新EP管（350ml）。
6、按比例（1ml Trizol：500ul异丙醇）加入异丙醇500ul，混匀，4℃放置10min。
7、4℃ 12000×g 离心10min，弃上清，RNA 沉于管底。
8、按比例（1ml Trizol：1ml 75%乙醇）加入75%乙醇1ml，温和振荡。
9、4℃ 12000g 离心 5min，尽量弃上清（重复75%乙醇洗涤一次）。
10、室温晾干。
11、加用5ulRNA溶解液溶解沉淀RNA。

所测RNA浓度：50多ug/ml

hzangs · 发表于 2016-3-10 19:12:35

楼主 400ul血浆吧？

jianwen · 发表于 2016-3-10 19:46:36

hzangs 发表于 2016-3-10 19:12
楼主 400ul血浆吧？

不好意思，打错了，是400ul。
感觉提取的RNA浓度比较低。后面用800ul提取的外泌体送去做高通量测序结果也差，说RNA浓度太低了

ashey · 发表于 2016-3-13 21:30:55

life不是有专门的提取exosome RNA的试剂盒吗？有没有尝试下看看结果如何？exosome中RNA可按照细胞RNA提取步骤吗？会不会有影响？

Bridgen桥生物 · 发表于 2016-3-15 22:30:51

用一般的试剂盒提取出的外泌体很难提到完整的外泌体，可通过颗径分析知道自己提出的是否完整，数量多少。

胖子的心境 · 发表于 2016-3-21 10:05:32

50ug/ml，只用了5ul的水溶解？量这么少吗。新手问问

zzy · 发表于 2016-5-11 15:09:41

楼主，血浆还是血清？

jianwen · 发表于 2016-5-19 16:47:02

zzy 发表于 2016-5-11 15:09
楼主，血浆还是血清？

用的血浆，最近在做血清的

jianwen · 发表于 2016-5-19 16:48:02

胖子的心境发表于 2016-3-21 10:05
50ug/ml，只用了5ul的水溶解？量这么少吗。新手问问

确实好少，还在摸索中

jianwen · 发表于 2016-5-19 16:49:24

Bridgen桥生物发表于 2016-3-15 22:30
用一般的试剂盒提取出的外泌体很难提到完整的外泌体，可通过颗径分析知道自己提出的是否完整，数量多少。 ...

检测了浓度和大小，还可以

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