求助：血清SBI提取外泌体上电镜前的稀释倍数

子非鱼

如题，在用SBI试剂盒提取了人血清外泌体，250μl血清+63μlSBI试剂，得到的沉淀，40μlPBS溶解。现在想上电镜，电镜老师说浓度不能过高，想请问大家，这个稀释倍数，或者做过的大神推荐一下，多谢多谢！

wanghx_85

看你沉淀量有多少吧，我之前就是浓度太高投射电镜就不行，打不过去，后来做出来还可以的那次我加了1mlPBS（EP管底看到了一小坨沉淀），血清外泌体用SBI提的话得率比较高呢

子非鱼

wanghx_85 发表于 2016-1-14 12:12
看你沉淀量有多少吧，我之前就是浓度太高投射电镜就不行，打不过去，后来做出来还可以的那次我加了1mlPBS（ ...

wanghx同学，再跟你确定一下啊，你也是SBI盒子，250μl血清+63μlexoquick试剂提取，然后加1mlPBS，做出来的还可以，是吗？我预约的是下周做，如果可以我就按100μlPBS和你的条件上两个样本先看看结构摸摸条件了。

wanghx_85

子非鱼 发表于 2016-1-14 12:34
wanghx同学，再跟你确定一下啊，你也是SBI盒子，250μl血清+63μlexoquick试剂提取，然后加1mlPBS，做出 ...

不是100ul，是500ul到1ml不等，关键看沉淀量呢，血清标本的话有个体差异的嘛，您说是不？

子非鱼

wanghx_85 发表于 2016-1-22 21:42
不是100ul，是500ul到1ml不等，关键看沉淀量呢，血清标本的话有个体差异的嘛，您说是不？ ...

是，多谢~~！！

zqlhiiaxyz

楼主好，我看您的exosome原液是40ulPBS溶的。那您最后上电镜是取了多少原液，如何稀释的？电镜结果如何？还有，您做WB了吗？稀释多少倍合适？蛋白上样量多少呢？

子非鱼

zqlhiiaxyz 发表于 2016-5-12 16:37
楼主好，我看您的exosome原液是40ulPBS溶的。那您最后上电镜是取了多少原液，如何稀释的？电镜结果如何？还 ...

之前用600ul溶的，不知道太稀还是怎么，又是第一次做，反正没认出来；后来300ul溶，上电镜又浓，膜破了，so准备试第3次；
做过WB了，200ul溶解后，取出10ul来再进行4倍稀释，做出来的，结果一般般，没细胞的好看，上样量15ug左右。

zqlhiiaxyz

楼主，非常感谢您的回复！弱弱地再问一句。您提取的最后是40ulexosome原液。后来稀释是从中取了10ul溶的，还是将40ul全都溶了？
我看您用600ul溶后做电镜，用200ul溶后用作WB，是将40ul原液全溶了吗？

子非鱼

zqlhiiaxyz 发表于 2016-5-13 16:21
楼主，非常感谢您的回复！弱弱地再问一句。您提取的最后是40ulexosome原液。后来稀释是从中取了10ul溶的， ...

这个看自己的实验安排了，有后续实验那就吸取少许溶解，否则，全溶了也没差，是吧

崔雪娇123

wanghx_85 发表于 2016-1-22 21:42
不是100ul，是500ul到1ml不等，关键看沉淀量呢，血清标本的话有个体差异的嘛，您说是不？ ...

你好，我也是用SBI的试剂盒提血清的外泌体，想做投射电镜。我是取250UL的血清，加63Ul的试剂，溶在30Ul的PBS中，然后取10ul稀释到50Ul，取出一滴作的电镜，用的负染，老师说没有外泌体。想请教下如何改进，你是怎么做的。