6.A live cell reporter of exosomesecretion and uptake reveals pathfinding behavior of migrating cells.外泌体分泌和摄取的活细胞报道分子揭示了迁移细胞的寻路行为。[Nat Commun] IF=11.878 PMID:32350252摘要:称为外泌体的小细胞外囊泡会影响多种了自分泌和旁分泌细胞表型。解外泌体的功能需要多种工具,包括实时成像。我们以前的活细胞报道分子pHluorin-CD63可以在亚细胞水平动态监测迁移和扩散细胞中外泌体的分泌。但是,荧光昏暗和在细胞系中无法稳定表达限制了它的使用。我们在pHluorin部分M153R中加入了稳定突变,该突变现在在细胞中表现出更高,稳定的表达,并且对外泌体分泌进行了出色的监测。使用这种改进的构造,我们可以在体外3D和体内可视化分泌的外泌体,并确定外泌体在促进2D和3D迁移中的领导跟随者行为中的作用。并入其他非pH敏感的红色荧光标记可实现外泌体生命周期的可视化,包括多囊体(MVB)转运,MVB融合,外泌体摄取和内体酸化。该报告系统将成为了解外泌体自分泌和旁分泌作用的有用工具。PS:外泌体的实时示踪技术的缺乏是目前外泌体研究面临的主要困难之一,这篇文章提出了一种可以实时追踪外泌体的标记策略,并通过实验对这一系统进行了功能验证。 附件已隐藏,回复该贴可查看附件