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外泌体测浓度方法

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发表于 2016-6-16 14:49:59 | 只看该作者 回帖奖励 |倒序浏览 |阅读模式
提外泌体的细胞上清里面含有没有外泌体的血清,里面应该是含有蛋白质的,我们后来用BCA测浓度,如何排除这部分蛋白的影响?或者大家有什么更好的方法,请大家指点一下
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发表于 2016-6-17 12:15:17 | 只看该作者
超速离心之后 PBS 洗1-2次的目的就在于去除这些杂蛋白的影响。当然最后还是会多多少少残留一些
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发表于 2016-6-19 14:25:06 | 只看该作者
hzangs 发表于 2016-6-17 12:15
超速离心之后 PBS 洗1-2次的目的就在于去除这些杂蛋白的影响。当然最后还是会多多少少残留一些 ...

请问您用超离提exosome后能看到沉淀吗?测外泌体蛋白浓度用的是哪种方法(BCA法还是BIO-RAD的BRADFORD法)?测的时候需不需要将exosome裂解?还是直接测膜蛋白?我测了两次,用的BRADFORD,都没测出来,提的时候也没看到沉淀。谢谢了
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地板
发表于 2016-6-19 20:31:28 | 只看该作者
LQLQLQ 发表于 2016-6-19 14:25
请问您用超离提exosome后能看到沉淀吗?测外泌体蛋白浓度用的是哪种方法(BCA法还是BIO-RAD的BRADFORD法 ...

可以看到沉淀的。使用BCA法。不需要裂解。  去掉上清的时候不要倒,用移液器洗掉上清
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发表于 2016-6-20 17:16:21 | 只看该作者
文献里说是要裂解的吧,不裂解没试过
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发表于 2016-6-21 11:50:21 | 只看该作者
hzangs 发表于 2016-6-19 20:31
可以看到沉淀的。使用BCA法。不需要裂解。  去掉上清的时候不要倒,用移液器洗掉上清 ...

嗯,好的,多谢师兄!
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 楼主| 发表于 2016-7-1 14:23:11 | 只看该作者
谢谢大家,是可以看到沉淀的,很少,但是感觉用PBS很难溶解。
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发表于 2021-6-16 21:34:36 | 只看该作者
hzangs 发表于 2016-6-19 20:31
可以看到沉淀的。使用BCA法。不需要裂解。  去掉上清的时候不要倒,用移液器洗掉上清 ...

老师,请问沉淀很难溶解怎么办?测的已经溶解的部分浓度在0.2mg/ml,不敢再加PBS了~另外,请问目前测浓度的话,还需要裂解吗?感觉如果不裂解,外泌体的浓度会低呀~谢谢老师~
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发表于 2022-10-21 10:32:21 | 只看该作者
先提取外泌体吧
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