组织（心脏）中外泌体的提取方法？

大琳宝儿

刚开始做外泌体，有很多阻力，1：很多关于提取培养液或者血液中的exosome的方法，那能不能从组织中有效的提取exosome呢？是不是exosome的形成和分泌很快，不能在细胞内富集，所以不能直接检测组织内的exosome呢？不知道我的陈述正不正确，嘿嘿 2：关于exosome 里miRNA的PCR，内参和外参的选择？ 3：我在文献中看到心肌细胞分泌的exosome没有四跨膜蛋白超家族，所以什么CD63 CD9 CD81都不能在免疫组化的试验中应用了，那可以用什么特异性蛋白呢？
请大家畅所欲言，顺便帮帮忙~谢谢啦

大琳宝儿

Extracellular Vesicles in Heart Disease: Excitement for the Future ?
里面提到
However, many other
proteins previously found in EVs in other studies, including HSP90 and the tetraspanins,
were not seen in the CM-derived EVs [21]. In contrast, another study did identify previously
reported tetraspanins in EVs derived from human microvascular endothelial cells in culture
[24].
那请问你用的什么蛋白质作为exosome的标志蛋白啊？

dancer0711

Cardiomyocytes mediate anti-angiogenesis in type 2 diabetic rats through the exosomal transfer of miR-320 into endothelial cells。J Mol Cell Cardiol. 2014 Sep;74:139-50. doi: 10.1016/j.yjmcc.2014.05.001. Epub 2014 May 10
这篇文章里用的就是CD63还有CD81

大琳宝儿

J Immunol. 2008 Oct 15;181(8):5242-8.
Thymus exosomes-like particles induce regulatory T cells.找到几篇，这篇感觉方法最容易，希望能成功

大琳宝儿

Johnny 发表于 2015-3-12 16:07
1. 我觉得组织中的exosome是没法提取的，exosome是一种细胞分泌到细胞外的微小膜泡。目前没有文献报道分离 ...

有人提过，但是我也不觉得组织细胞内的能提出来，细胞内的exosome还是多泡体呢，所以应该提不出来~但是我已经找到很多文献里提取组织细胞间液的exosome了，应该量不大，但这个就可行多了
2：关于内参我看有很多用snU6的 蛋白western也有用actin的 也有说用总蛋白作内参的 但这个不太理解
3：应该是有4跨膜蛋白超家族 我之前看到的那篇可能是阴性结果 不足以这么说 嘿嘿

大琳宝儿

大琳宝儿 发表于 2015-3-15 20:42
J Immunol. 2008 Oct 15;181(8):5242-8.
Thymus exosomes-like particles induce regulatory T cells.找到 ...

我也找到了 嘿嘿 里面提的是组织细胞间液的，我试了一下 文献中说用两个玻璃片将组织磨碎，但是磨碎之后的液体和组织碎片很难收集到ep管中 而且蒸发很快 所以现在再试着吧组织放在PBS里，用研磨棒研磨，再过滤膜 再用SBI试剂盒提取  周一看电镜 不知道结果呢 好紧张哎呀，一不小心回复了自己……

大琳宝儿

Johnny 发表于 2015-4-10 14:23
是你要分离组织中的exosome来着？    给你推荐篇文献

感谢~嘿嘿

telomerase

研磨结果如何？请问，我也想做这方面的，谢谢！