有囊泡相关技术问题请在该贴留言！

hzangs

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hzangs最近几个月比较忙，没时间逐一阅读大家发的帖子。 有什么问题的话可以在这个帖子留言。如果是我之前没有总结过的问题，我看到后会回复。

hzangs

hjj 发表于 2018-7-9 15:08
您好，想请问一下，外泌体载药的话，浓度怎么确定呢？老师能推荐一些外泌体载药的文献吗？？ ...

如果这个浓度能查出来，你的工作量就没多少了。 载药浓度不同的药、不同的来源的外泌体、不同的负载方法都不一样。 这个需要你自己去读十几篇paper  然后好好规划一下，设置不同的梯度 然后寻找一个合适浓度。

奥比克

想知道有没有PKH67跟踪外泌体的Protocol，谢谢hzangs大神

hjj

您好，想请问一下，外泌体载药的话，浓度怎么确定呢？老师能推荐一些外泌体载药的文献吗？？

hzangs

奥比克 发表于 2018-7-7 20:11
想知道有没有PKH67跟踪外泌体的Protocol，谢谢hzangs大神

这个没有。。。   大概的方法在论坛里之前就讨论过。 一般是先和纯化好的外泌体共孵育，然后再重新从体系中纯化外泌体，在于你的受体细胞共孵育。    里面没什么太多的难度，基本没有整理过protocol

lictic

请问是否每次提外泌体都需要测浓度？同种细胞系每次提取的外泌体蛋白量变化大吗？能否通过毫升数、皿数进行估算

yunyu

hzangs老师，我们在做5%，10%，20%，40%的OptiPrep梯度，离心100000*18h，但做出来杂ALIX带很弥散，在每层里都有。想问一下做OptiPrep梯度是要跟蔗糖梯度一样做好之后过夜等蔗糖自由扩散么?还是有啥其他问题

hzangs

lictic 发表于 2018-7-9 21:49
请问是否每次提外泌体都需要测浓度？同种细胞系每次提取的外泌体蛋白量变化大吗？能否通过毫升数、皿数进行 ...

每次测浓度。

hzangs

yunyu 发表于 2018-7-10 09:16
hzangs老师，我们在做5%，10%，20%，40%的OptiPrep梯度，离心100000*18h，但做出来杂ALIX带很弥散，在每层 ...

没有试过optiprep，  不建议以wb的结果来评判实验的成败。 ALIX这种蛋白只是在外泌体里富集，并非只存在于外泌体中。 以电镜结果为准~~

yazisummer

hzangs大神!
我用原代培养的细胞，无FBS培养基饥饿48小时后，收取上清，4度存放了两天。20，000g 4度离心20min,    10,000g 4度离心30min后，100，000g 4度离心2h后未有可见沉淀。 去上清加PBS后100，000g 4度离心1h未见可见沉淀。
加150ulpbs冲洗管底和壁，直接去此溶液未裂解BCA测浓度。浓度跟空白一样。
谢谢hzangs大神指教，看看我的问题出在哪里？