关于用试剂盒提取外泌体的浓度太低

yanan228

不知道有没有跟我一样用life公司的Total Exosome Isolation Reagent (from cell culture media)试剂盒提取外泌体的，1ml上清加500ul试剂，不过最后提取出来的外泌体用BCA测浓度比较低，但是提高上清的收集量，试剂就要相应的多添加（老板手里钱不多，还是想省点）有人情况跟我一样么，或者给我些指导，不知道是不是我的方法出了什么问题

seallin

样品1 mL太少了，浓度低很正常，可以考虑浓缩样品后再处理

hzangs

seallin 发表于 2016-5-17 16:11
样品1 mL太少了，浓度低很正常，可以考虑浓缩样品后再处理

你尝试过 浓缩多少倍？  我之前用life的试过一次  浓缩了四五倍吧， 然后沉淀太多了……  不过我当时用的有血清的培液。

yanan228

seallin 发表于 2016-5-17 16:11
样品1 mL太少了，浓度低很正常，可以考虑浓缩样品后再处理

谢谢你，不过样品要怎么浓缩啊？

yanan228

hzangs 发表于 2016-5-17 16:14
你尝试过 浓缩多少倍？  我之前用life的试过一次  浓缩了四五倍吧， 然后沉淀太多了……  不过我当时用的 ...

请问样品如何浓缩？？

seallin

用3 k滤膜进行浓缩即可，1 mL我的经验稍微有点少

yanan228

seallin 发表于 2016-5-18 13:33
用3 k滤膜进行浓缩即可，1 mL我的经验稍微有点少

能详细的说下3k滤膜是什么么？一般不都是说滤膜的大小么？比如0.22um的滤膜，我是研一的学生，很多都不懂，请多指教，谢谢

seallin

yanan228 发表于 2016-5-18 22:41
能详细的说下3k滤膜是什么么？一般不都是说滤膜的大小么？比如0.22um的滤膜，我是研一的学生，很多都不懂 ...

既然是浓缩，外泌体肯定不能滤过，因此选用密理博的3 k滤膜进行离心，3k指的是截留的分子量

yanan228

seallin 发表于 2016-5-19 14:26
既然是浓缩，外泌体肯定不能滤过，因此选用密理博的3 k滤膜进行离心，3k指的是截留的分子量 ...

非常感谢，我上网查到了这个牌子的离心管，大概都明白原理了。