关于外泌体提取量的几个问题

陆峰彬

刚接触外泌体，希望前辈们指教，谢谢！我的问题：
1、文献中提到细胞饥饿处理24或48小时，请问这两者对外泌体的提取量有什么区别，如果没有区别，那能否饥饿处理两次，收集两次上清液，别怪我这么抠，由于提间充质干细胞的外泌体做小鼠实验，所以需要量比较多！
2、论坛中有前辈，用去外泌体的FBS培养细胞，那去外泌体FBS超速离心的FBS浓度可以用纯FBS或者10%FBS？
3、如果用去外泌体的FBS培养细胞，那能否重复利用细胞提外泌体？提的问题比较多，请见谅！

lenoch

饥饿时间越久，细胞当然产生的exosome量越多，所以48h个人感觉比24小时好，MSC耐饿，但是饿了之后细胞状态会很差。如果你觉得好的话可以重复利用试试，记得告诉我。
超离后的FBS你就把它当做FBS，该怎么加就怎么加。但是根据我的观察，用沉淀法提取的你会发现加了血清的上清有大量沉淀，别高兴，那是大量的蛋白。真正超离提纯之后你会发现exosome量饥饿后产生的明显多。但是，问题在于饥饿和不饥饿对exosome的内含物有没有影响？？？？
可以重复利用，问题在于有血清长48小时很多细胞会把自己挤死了。尤其是商品化的细胞。原代细胞会好一些。因此建议你趁细胞60-70%或者估算着48h后刚好长满的时候加入无exo血清的培养基。这样细胞48h后刚好可以长满，再重复传代，一举两得。

appleseed

帮顶，我也新手刚接触这个

qyjinghui

lenoch 发表于 2016-5-11 12:43
饥饿时间越久，细胞当然产生的exosome量越多，所以48h个人感觉比24小时好，MSC耐饿，但是饿了之后细胞状态 ...

老师您好，咨询个问题，我们打算比较药物处理后细胞产生外泌体的内容物变化，用药物处理2天后，细胞已经长满了，这时候我是应该把培养液收集起来，还是应该加新鲜培养液继续培养2天后收集呢？之所以考虑后者是想彻底排除上清中残留药物对结果的影响。但是细胞在药物处理完就已经长满了，需要传代后再收集？请您指点一二，谢谢。