寻求外泌体透射电镜固定方法？

陆峰彬 · 发表于 2016-10-13 22:05:15

去学校电镜室做电镜，那边老师要求将外泌体固定后做电镜，想请问有没有前辈了解相关方法的，或者能提供参考文献的，先谢谢了!

dancing · 发表于 2016-10-14 10:34:57

The samples were dissolved in HEPES (4-[2-hydroxyethyl]-1-piperazine ethanesulfonic acid) buffer, and a drop of the suspension was placed on a sheet of parafilm（一张保鲜膜）. A carbon-coated copper grid（碳涂层铜网格） was floated on the drop for 10 seconds. Then, the grid was removed, and excess liquid was drained by touching the edge of the grid against a piece of clean filter paper. The grid was touched onto a drop of 2% uranyl acetate（醋酸双氧铀）or phosphotungstic acid（磷钨酸）, pH 7.0, for approximately 5 seconds, and excess liquid was drained off. The grid was allowed to dry for several minutes and then examined using a JEM-1200 EX microscope (JEOL, Akishima, Japan) at 80 kiloelectron volts.
我还没有做出很好看的电镜，因为样品提取的不好，杂质比较多，我们可以相互交流

hzangs · 发表于 2016-10-14 15:47:12

我记着 2006年的那个protocol 里面的电镜图就是固定后做的！

hereissyk · 发表于 2016-10-15 08:45:35

不固定也可以的。。。丑一点而已

陆峰彬 · 发表于 2016-10-16 11:37:42

dancing 发表于 2016-10-14 10:34
The samples were dissolved in HEPES (4-[2-hydroxyethyl]-1-piperazine ethanesulfonic acid) buffer, an ...

你这个方法好像没有用到固定。请问你那个保鲜膜是细胞房那种防污染的透明膜？还有你用的铜网是普通铜网？不好意思问的比较多，感谢回答！

陆峰彬 · 发表于 2016-10-16 11:38:18

hereissyk 发表于 2016-10-15 08:45
不固定也可以的。。。丑一点而已

不固定电镜老师说会损害机器

陆峰彬 · 发表于 2016-10-16 11:53:10

hzangs 发表于 2016-10-14 15:47
我记着 2006年的那个protocol 里面的电镜图就是固定后做的！

找到了，谢谢！

dancing · 发表于 2016-10-18 16:36:56

陆峰彬发表于 2016-10-16 11:37
你这个方法好像没有用到固定。请问你那个保鲜膜是细胞房那种防污染的透明膜？还有你用的铜网是普通铜网？ ...

我们这边做电镜都没有固定，大部分文献里也没有用到固定，铜网做电镜的老师会给

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