十年磨一剑，终于做完啦！！--投稿全记录

惜名

好吧，我承认我是标题党。。。
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鄙人实验室有2个人主要做exo，一个是师兄（其实和我一届，但年龄比我大很多），一个是我。
师兄平时要上临床，因此很忙，做的是DC-exo-Cardiomyocytes，未涉及很多机制，匆匆做了点现象，就投稿了。
被拒了。。。
其中一条拒稿意见是这样的：
The method of exosome isolation - ExoQuick is a well accepted method of exosome isolation. The yield is high, but the specificity is low. This paper (Lobb RJ Optimized exosome isolation protocol for cell culture supernatant and human plasma, J Extra Vesc, 2015) nicely sums up the problem: "In conclusion, both ExoQuickTM and Exo-spinTM have significantly more non-exosomal protein contamination as evidenced by the particle/protein ratio combined with increased exosome marker expression in qEV and density gradient isolations."  This is borne out by your suspiciously high yield of protein from exosomes 10+ ug.  Therefore, a number of non-exosomes may also be present in the tail-vein injections resulting in signaling from these activated dendritic cells.  I encourage you to make note of this methodologic limitation in your conclusion.
用kit的童鞋们，都要小心啦。。。
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鄙人也基本做完了，正在整理数据写文章。
本着21世纪的“互联网分享精神”，打算在下次小聚时与大家分享我所有的结果。

OK，你们终于发现了，这其实是一个广告贴！！！
欢迎来参加“魔都外泌体论坛第三次线下聚会”
时间初步定于十一之后的第一个周末，地点在上海·二军大。

wooway

这样麻烦就大了。。。我这都是在用KIT做。。。。。。

wooway

然后的确用KIT提取的外泌体然后提的蛋白浓度很高。。。。怀疑就是这个原因。。

yy8651

哎呀呀，投的哪个杂志啊？意思就是kit不行呗？

yy8651

分享结果，看来版主真的都做完了。好好哟！

惜名

yy8651 发表于 2015-9-6 20:31
哎呀呀，投的哪个杂志啊？意思就是kit不行呗？

投的JMCC

hereissyk

幸苦我买的两个试剂盒都不好用逼我一直用超离。。。

chyi

冲标题来的。。。

seallin

其实我的提取方法也是破解了商品化的方法，我担心我也会被同样的意见拒搞~~~~

seallin

我仔细看了你同学的那个审稿意见和原文，发现了一个被忽视的地方，如果能抓住这个漏洞，我想能很好的说服审稿人。我们知道，做超速离心的时候，最后会用PBS冲洗一遍，这样就除去了大多数的蛋白。而商品化的kit提取之后，很难再用PBS冲洗一遍，不然就会散掉。打个比方，超速离心90%是exosome蛋白，而商品化kit由于没有反复清洗，可能很多还是牛血清的蛋白。这个原因才导致了原文中为什么横向对比WB实验中，商品化kit效果不如离心的原因。其实用商品化kit的时候也是可以洗的，当然这需要操作者的经验，如果能好好的洗干净血清，WB的结果还是很不错的。这不能说明kit的效果不佳，只是我们的后续操作不够到位。