细胞培养液中外泌体的提取步骤

lczyld · 发表于 2017-8-10 23:00:36

本人最近在准备提取细胞培养液上清中的外泌体，准备按照以下步骤提：

一、conditioned medium (CM) 的收集

1、细胞种在100mm 培养皿中，正常培养基下培养，等密度达到75%左右。

2、弃去培养液，PBS洗3遍

3、加入10% exosome-free serum的DMEM/F12培养液 10ML

4、培养箱中培养48小时后，开始处理细胞，进行MPC,HPC

5、处理完成后用无菌离心管，收集各组细胞培养液。

6、收集的CM，4℃ 300g 10min 去除残存细胞，4℃ 2000g 20min 去除细胞碎片等。

7、得到的上清液，经 0.22μm 滤器过滤，转移至 Amicon Ultra-15 100K NMWL 进行超滤浓缩得到浓缩后的上清

然后按照ExoQuick-TC Exosome Precipitation Solution (System Biosciences) 的试剂盒步骤进行提取。

有没有前辈和做过的大神给予些指导呀？万分感谢！

chrismoring · 发表于 2017-8-11 21:16:43

请问您培养的什么细胞？

lczyld · 发表于 2017-8-12 08:49:53

chrismoring 发表于 2017-8-11 21:16
请问您培养的什么细胞？

培养的是 H9C2

huang_0207 · 发表于 2017-8-13 09:27:56

进行MPC,HPC是什么意思啊

八戒在五湖 · 发表于 2017-8-13 14:17:25

我用超滤然后用试剂盒提过一次，60mL超滤出来就几百微，颜色是深红色，试剂盒提完之后跑WB，CD9,CD63没条带

chrismoring · 发表于 2017-8-13 18:15:19

八戒在五湖发表于 2017-8-13 14:17
我用超滤然后用试剂盒提过一次，60mL超滤出来就几百微，颜色是深红色，试剂盒提完之后跑WB，CD9,CD63没条带 ...

您是用SBI的试剂盒吗

八戒在五湖 · 发表于 2017-8-14 08:53:34

chrismoring 发表于 2017-8-13 18:15
您是用SBI的试剂盒吗

是的，SBI

lczyld · 发表于 2017-8-28 14:51:49

八戒在五湖发表于 2017-8-13 14:17
我用超滤然后用试剂盒提过一次，60mL超滤出来就几百微，颜色是深红色，试剂盒提完之后跑WB，CD9,CD63没条带 ...

请问后来您是怎么处理的？

lczyld · 发表于 2017-9-1 08:47:20

Kmapauc 发表于 2017-8-31 16:22
同问进行MPC,HPC是什么意思啊

这个不重要，是我们的药物处理。请问你也做这个么，可以交流交流下

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