加药处理细胞再分离外泌体的困惑

qyjinghui

  接触外泌体有快一年的时间了，有个外泌体样本制备过程中的问题一直困惑未解，特求教诸位前辈大神，我想研究加药处理后exo内容物的成分变化，看到过两种收集外泌体的方法，
1.加药处理2天，处理后直接将含有药物的培养上清收集再分离外泌体成分；
1.加药处理2天，处理后将含有药物的培养上清丢弃，添加新鲜的培养液，继续培养1-2天后收集、分离外泌体成分。
  个人感觉，第1种方法过程较简单，如果只是研究exo内容物的变化应该就可以用了，第2种方法，排除了分离exo成分中的残余药物，如果用来做功能验证，可能更为科学。无奈，我的细胞如果长满了，长时间不传代，会有部分细胞漂浮起来，不贴壁。所以实际操作起来，我经常用第一种方法。但是这两种方式，哪种更好呢？
  真诚求教各位前辈指点，今天终于能自己发帖了，好激动新手上路，奖金不多，感谢大家！

hzangs

这个要根据自己的具体实验来说吧。   如果你看内容物是蛋白或者RNA   有没有你的药物存在 影响不大的。  而且超离分离外泌体有后续洗涤步骤，这些会让外泌体样品中的药物残留减少的。

qyjinghui

hzangs 发表于 2017-10-31 22:33
这个要根据自己的具体实验来说吧。   如果你看内容物是蛋白或者RNA   有没有你的药物存在 影响不大的。  而 ...

好的，谢谢张老师，我还是用第一种方法吧，加药处理2天，处理后直接将含有药物的培养上清收集再分离外泌体成分，这样细胞活力比较好，十分感谢您的意见！