用BCA法测定外泌体浓度问题

小朋友玩 · 发表于 2018-3-19 10:25:09

用BCA法测定外泌体浓度时, 37℃孵育1小时, 发现外泌体的孔中颜色变化不大, 与标准曲线中的BSA浓度为0的空白孔的吸光度值相同, 但是过夜孵育后, 外泌体孔中的吸光度发生变化了, 并且与标准曲线中BSA浓度为0 的空白孔差异较大, 请问出现这个现象,外泌体是蛋白浓度为0呢,还是通过过夜孵育的OD值计算?

haks · 发表于 2018-3-19 11:00:33

说明书上没过夜这么长的时间吧，BCA试剂盒测其他样品（如细胞）正常吗。

小朋友玩 · 发表于 2018-3-19 15:38:04

haks 发表于 2018-3-19 11:00
说明书上没过夜这么长的时间吧，BCA试剂盒测其他样品（如细胞）正常吗。

我就测过外泌体,有的时候能测出来,有的时候不能测出来.

hereissyk · 发表于 2018-3-19 20:38:22

是你外泌体浓度太低了，超过30分钟就不准了，过夜肯定不准的

小朋友玩 · 发表于 2018-3-20 16:18:07

hereissyk 发表于 2018-3-19 20:38
是你外泌体浓度太低了，超过30分钟就不准了，过夜肯定不准的

我一般都是孵育一个小时, 一个小时也可以的

JKF · 发表于 2018-3-20 21:06:04

BCA孵育一般是半个小时就够了，肯定不能用过夜的。时间越久，OD值会越大，那样就不准确了。这说明你的外泌体蛋白浓度太低了。

小朋友玩 · 发表于 2018-3-20 21:51:59

JKF 发表于 2018-3-20 21:06
BCA孵育一般是半个小时就够了，肯定不能用过夜的。时间越久，OD值会越大，那样就不准确了。这说明你的外泌 ...

的确是浓度有点低,你们是用无血清饥饿处理吗?

小朋友玩 · 发表于 2018-3-22 19:26:29

小朋友玩发表于 2018-3-20 21:51
的确是浓度有点低,你们是用无血清饥饿处理吗?

是的ZSSZS

JKF · 发表于 2018-3-22 19:56:35

小朋友玩发表于 2018-3-20 21:51
的确是浓度有点低,你们是用无血清饥饿处理吗?

我暂时还没有提过培养上清的外泌体，正常一般是饥饿处理细胞的，或者用无外泌体血清培养。

我是外泌体 · 发表于 2018-3-23 15:47:06

BCA 不是测蛋白的吗

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用BCA法测定外泌体浓度问题

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