求助：血清外泌体提取250ng，跑电泳啥也没有...没有...

子非鱼 · 发表于 2016-5-4 18:25:35

本帖最后由子非鱼于 2016-5-4 22:20 编辑

RT,SBI提取250ul血清的exo后，60ulPBS溶解后冻存在-80℃，最近拿出来提了RNA，测浓度后总量250ng，但跑电泳后什么也没有，没有条带！！但是同时提取的细胞和组织都有明显的条带，我知道exo和cell、tissue的RNA条带模式不一样，但是应该在20-200之间有个条带吧，但是什么也没有，有可能被降解完吗？可是exo不是相对稳定的吗？难道一开始提出来就加TRIZO吗？或者250ng对于跑电泳量来说还是太少？。。走过的路过的赶紧来指点迷津啊

hzangs · 发表于 2016-5-4 21:11:14

电泳检测RNA 灵敏度非常差…… 没有意义的。
你可以考虑逆转录一些，然后跑几个PCR 看看能不能克隆到一些已知的基因。

子非鱼 · 发表于 2016-5-4 22:23:49

hzangs 发表于 2016-5-4 21:11
电泳检测RNA 灵敏度非常差…… 没有意义的。
你可以考虑逆转录一些，然后跑几个PCR 看看能不能克隆到 ...

我们准备做exo内miRNA芯片，筛选差异性exosomal miRNA，公司要求我们跑电泳图看看我们提出来的exo-RNA质量，结果一跑电泳，心都凉了...
斑竹的办法我试试...

hzangs · 发表于 2016-5-5 00:50:44

子非鱼发表于 2016-5-4 22:23
我们准备做exo内miRNA芯片，筛选差异性exosomal miRNA，公司要求我们跑电泳图看看我们提出来的exo-RNA质 ...

一般小RNA电泳不用琼脂糖胶

子非鱼 · 发表于 2016-5-5 15:39:28

hzangs 发表于 2016-5-5 00:50
一般小RNA电泳不用琼脂糖胶

那用什么胶？

hzangs · 发表于 2016-5-5 18:01:54

子非鱼发表于 2016-5-5 15:39
那用什么胶？

PAGE胶

子非鱼 · 发表于 2016-5-5 19:20:54

本帖最后由子非鱼于 2016-5-5 19:22 编辑

hzangs 发表于 2016-5-5 18:01
PAGE胶

斑竹，V5~~我刚问了下我们这里表观遗传学的人，和您说的一样！膜拜~~

，幸亏问了，不然我就在错误的道路上越走越远了.......

DogGuo · 发表于 2016-5-5 21:23:03

PAGE胶怎么检测？有具体方法么？

hzangs · 发表于 2016-5-5 22:55:55

DogGuo 发表于 2016-5-5 21:23
PAGE胶怎么检测？有具体方法么？

这个随便百度或者必应或者谷歌都可以找到。我这里没有现成的protocol

乌克丽丽的橙子 · 发表于 2016-8-31 17:33:00

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