JEV：单分子阵列技术检测血浆EV用于结肠直肠癌的液体活检

Johnny

JEV：单分子阵列技术检测血浆EV用于结肠直肠癌的液体活检

复旦大学附属肿瘤医院大肠外科李大卫副主任与梅里埃公司梁冀博士在Journal of Extracellular Vesicles杂志（影响因子14.976）上发表文章，使用单分子阵列技术（SiMoa）开发了细胞外囊泡免疫测定方法，并评估了其在癌症诊断中的临床应用。



从正常细胞和患病细胞连续分泌到各种体液中的细胞外囊泡（EVs）是大小不一的囊泡的异质混合物。外泌体和微泡（MVs）是由主要的两大类EVs，它们的细胞内起源和生物发生机制不同。如各种研究中所述，外泌体是源自多泡体（MVB）的小型EV（30–100 nm）。MVs是中等大小的EV，可直接从细胞膜发芽，直径范围为100至1,000 nm。

EVs携带几种代表它们细胞起源的膜结合分子和囊内分子。四次跨膜蛋白家族，例如CD63、CD9和CD81，主要用作EV /外泌体标记。肿瘤衍生的EV（T-EV）还表达了多种肿瘤表面标志物，例如上皮细胞粘附分子（Epcam）、表皮生长因子受体（EGFR）和CA125。近年来，利用这些生物标志物追踪体液中的EV/T-EV成为一种非侵入性的癌症液体活检方法，尽管这种潜在的应用前景广阔，但在临床样品中鉴定和定量EV仍然具有挑战性。目前，提纯EVs最常用的方法涉及一系列高速超速离心步骤，这非常耗时，不适用于大量临床样品。单分子阵列（SiMoa）平台是一种新的超灵敏免疫测定技术，它允许使用全自动仪器通过ELISA免疫测定来测量蛋白质。Chang及其同事在2012年发表了SiMoa的基本理论。通过使用SiMoa，可以在治疗后的癌症预后研究中检测到表达水平非常低的蛋白质生物标志物，从而可以预测疾病的结果。

该研究首次使用SiMoa技术开发了两种针对EV标记的灵敏EV检测方法，可直接从癌细胞培养上清液或癌症患者血浆中分析EV或T-EV。此外，研究了它们在结直肠癌（CRC）诊断和预后中的临床效用。该研究设计了两种细胞外囊泡检测测定法CD9-CD63和Epcam-CD63，分别检测通用细胞外囊泡和肿瘤衍生的细胞外囊泡。结果表明，CD9-CD63和Epcam-CD63 SiMoa检测可特异性检测细胞外囊泡，不会检测到具有高敏感性的游离蛋白。在癌细胞培养基中检测到的Epcam-CD63水平与从同一癌细胞系分离并通过蛋白质印迹法检测到的表达Epcam的EV水平一致。此外，该测定法将癌症血浆样品与非癌性血浆样品区分开。与健康和良性对照相比，在结直肠癌患者中观察到最高的CD9-CD63和Epcam-CD63信号。两种测定均显示出对结直肠癌的优异诊断性能。此外，结果表明，CD9-CD63检测是无进展生存期和总生存期的独立预后因素，而Epcam-CD63检测是OS的独立预后因素。



CRC样品中EV检测测定的诊断值



CRC样本中EV检测分析的预后值

参考文献：WeiP, Wu F, Kang B, Sun X, Heskia F, Pachot A, Liang J, Li D. Plasma extracellular vesicles detected by Single Molecule array technology as a liquid biopsy for colorectal cancer. Journal Of Extracellular Vesicles.2020 Aug 26;9(1):1809765.附件已隐藏，回复该贴可查看附件  

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