血清离心去除外泌体的方法及用该血清配置的培养基的培...

下里巴人 · 发表于 2016-7-22 11:23:35

用细胞培养上清提取外泌体，需用不含外泌体的血清，一般先离心处理血清。文献报道的方法不一，我看到的用的比较多的方法是 110000g，12h。但是没有介绍离心之后具体的处理方法，比如丢弃多少沉淀？可以直接倾倒收集上清吗？还是要用移液器慢慢转移？此外，因为离心血清费时耗力，培养细胞的时候是不是可以先用没有离心的血清配置的培养基培养，在提取前24h or 48h 再换用离心过的血清配置的培养基呢？

请各位大侠不吝赐教！

hzangs · 发表于 2016-7-25 21:40:05

我一般是FBS 直接上机超离120000g 14-16h，然后移液器吸取上清留下超离体积10%左右的FBS（血清里的外泌体会在这部分里），上清转移到新管子再过0.45um的滤器除一次菌。细胞培养的时候每次铺50%密度的细胞，然后培养72小时收上清，再直接将细胞按50%的密度传代，这样3天收一次，一直使用exosome free的FBS配置的培液。
含有外泌体的那10%的FBS 不要丢弃，怪浪费的。你可以用来冻存细胞。如果你有状态不好的细胞也可以用这个FBS配置的培液养一养试试，我师弟曾经尝试过，这剩下的10%的FBS 养细胞细胞状态可好了！！！