超离提取血清外泌体的方法

anlinyuan · 发表于 2019-3-31 18:45:25

想请教大家，超离提人血清外泌体，文献有说15万g过夜离心，也有1万g70min*2，有点蒙圈，请问大家具体怎么处理的呢？？另外实验室条件有限，只有38.5ml大超离管离心不到2ml血清，是否会影响得率呢？？谢谢！！

yunxinxu · 发表于 2019-4-1 07:40:50

试试管子套管子，不保证安全！！

hzangs · 发表于 2019-4-1 10:10:18

离心速度与你最后收获的“外泌体样品”纯度有关系。离心速度越大，收到的样品纯度越低。另外血清可以考虑使用PBS稀释10~20倍然后再用38.5的管子去离心。一般10万g 70分钟是可以的。但是很难看到沉淀。

anlinyuan · 发表于 2019-4-17 17:11:30

谢谢大神！！我最近用大管子离了一下，发现第一次超离后就有那种白的沉淀，晃动管子的时候也跟着飘起来了，这难道是杂质蛋白？用PBS洗之前是不是要把它们吸走呢？

anlinyuan · 发表于 2019-4-17 17:12:46

yunxinxu 发表于 2019-4-1 07:40
试试管子套管子，不保证安全！！

哈哈这样的话实验室老师会把我轰出来

anlinyuan · 发表于 2019-4-17 17:13:19

hzangs 发表于 2019-4-1 10:10
离心速度与你最后收获的“外泌体样品”纯度有关系。离心速度越大，收到的样品纯度越低。另外血清可以考虑 ...

谢谢大神！！我最近用大管子离了一下，发现第一次超离后就有那种白的沉淀，晃动管子的时候也跟着飘起来了，这难道是杂质蛋白？用PBS洗之前是不是要把它们吸走呢？

jaybecks · 发表于 2019-8-7 14:22:50

hzangs 发表于 2019-4-1 10:10
离心速度与你最后收获的“外泌体样品”纯度有关系。离心速度越大，收到的样品纯度越低。另外血清可以考虑 ...

请问大神，我也在做血清外泌体，可是感觉提取的外泌体纯度不好，现在用的10万转3h+2h，应该怎么办哇

xrhaha · 发表于 2019-9-8 13:07:40

anlinyuan 发表于 2019-4-17 17:11
谢谢大神！！我最近用大管子离了一下，发现第一次超离后就有那种白的沉淀，晃动管子的时候也跟着飘起来了， ...

你好，请问一下你这个问题解决了吗？

anlinyuan · 发表于 2019-9-8 22:10:04

xrhaha 发表于 2019-9-8 13:07
你好，请问一下你这个问题解决了吗？

PBS用滤膜滤一下就可以了

xrhaha · 发表于 2020-1-11 10:46:08

anlinyuan 发表于 2019-9-8 22:10
PBS用滤膜滤一下就可以了

感谢回复！时隔这么久，不知道你还在做外泌体吗？想请教一下是否离过MCF-7细胞的外泌体？我用100mL培基离心基本上看不到任何东西，这是正常现象吗？

还有外泌体直接用商用PBS重悬-80保存就行，还是要另外加东西让它稳定呀？

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