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标题: 血清外泌体中WB有跑出TSG101、Alix的没？ [打印本页]
作者: zqlhiiaxyz    时间: 2016-7-28 17:17
标题: 血清外泌体中WB有跑出TSG101、Alix的没？
各位大神！用SBI的exoquick提血清外泌体，大家有跑出Tsg101和Alix的吗？跑了好几次了，曝光啥都没？求指导
作者: sldingxiang    时间: 2016-7-29 09:03
我分别用超离和SBI试剂盒提的外泌体，跑的alix，超离的能跑出条带，试剂盒跑的条带是很粗的一坨。抗体是CST的。
作者: zqlhiiaxyz    时间: 2016-7-29 18:50
谢谢您的回复！我是250ul血清用SBI试剂盒提的，沉淀直接用150ul 2XRIPA裂解液涡旋1min，室温放置了20min裂的，其后加了5x loading buffer 38ul，100度7min煮蛋白。做WB是加样10ul，做ALix曝光压片压了一夜，啥也没有。也是CST抗体，用的是Alix (3A9) Mouse mAb #2171，不知您用的哪种？我这些步骤中有没不合适的，麻烦您指导一下
作者: fan    时间: 2016-7-29 21:14
zqlhiiaxyz 发表于 2016-7-29 18:50
谢谢您的回复！我是250ul血清用SBI试剂盒提的，沉淀直接用150ul 2XRIPA裂解液涡旋1min，室温放置了20min裂 ...

理论上应该跑的出来的！并且你的蛋白很浓的！
作者: sldingxiang    时间: 2016-7-30 11:06
zqlhiiaxyz 发表于 2016-7-29 18:50
谢谢您的回复！我是250ul血清用SBI试剂盒提的，沉淀直接用150ul 2XRIPA裂解液涡旋1min，室温放置了20min裂 ...

　咱们用的是同一种抗体 步骤也大体相似，没看出有什么问题呢
作者: zqlhiiaxyz    时间: 2016-7-31 19:24
谢谢回复!我再试试吧！
作者: hereissyk    时间: 2016-8-1 17:11
别浪费钱用SBI了。
作者: 我是小白    时间: 2016-10-13 10:33
版主，你的两个抗体浓度分别是多少呢，我现在也在跑WB
作者: luchuan100    时间: 2017-8-5 16:38
楼主你好，现在遇到了同样的情况，跑的TSG101，不知楼主当时如何解决的
作者: minterist    时间: 2021-2-24 14:36
请问如果买不到TSG抗体，做ALIX可以替代TSG吗？
作者: 发货33    时间: 2022-3-15 13:35
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