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标题: 科研小白请教：尿液中的exosome其来源都有？ [打印本页]
作者: 旋转的尾音    时间: 2015-3-7 11:03
标题: 科研小白请教：尿液中的exosome其来源都有？
科研小白请教：
科研小白请教：尿液中的exosome其来源都有？是否仅限定于..泌尿系？
另外血液中的exo是否会滤过到尿液中？
想做肾脏标记物的方向，如果用外泌体蛋白筛选，怎样解释其肾脏来源更好一些？

谢谢~！
作者: 惜名    时间: 2015-3-7 12:45
不知道。。。请查阅文献吧，我们这个小站里做尿液的似乎不多，血清和培养上清居多~
作者: 旋转的尾音    时间: 2015-3-17 18:10
惜名 发表于 2015-3-7 12:45
不知道。。。请查阅文献吧，我们这个小站里做尿液的似乎不多，血清和培养上清居多~ ...

谢谢~这部分工作已经完成了，最近在纠结如果从尿液中提取外泌体蛋白来做质谱的话，会不会需要的尿量太大，有文献讲需要1L，也是醉了……
作者: 旋转的尾音    时间: 2015-3-17 18:11
Johnny 发表于 2015-3-7 12:48
泌尿系统所有细胞吧。。。可以查文献啊，Urinary exosome是有不少文献的

您说的很对，最近在纠结如果从尿液中提取外泌体蛋白来做质谱的话，会不会需要的尿量太大，不知道您是否有这方面的经验？
作者: 旋转的尾音    时间: 2015-3-17 22:51
Johnny 发表于 2015-3-17 20:33
Urinary没做过

请问，咱小站里有没有人在做啊~？
作者: evomicscience    时间: 2015-6-3 09:59
尿液最主要的问题是THP蛋白，量太大，网住了大量的Exosome，DTT和CHAPS处理绝对影响細胞和E×osome的完整性.第二个问题是尿液中的E×osome含量太低，和细胞培养液差不多，第三是样本变异大，晨尿和白天的尿液成份差老远，没有一个很好的对照物.我们一直在做的Biomarker方面的开发，例如PKD多狼浪肾，急性肾排斥，前列腺癌的早期诊断，谁要是有兴趣，可和我联系.
作者: seallin    时间: 2015-6-3 10:31
evomicscience 发表于 2015-6-3 09:59
尿液最主要的问题是THP蛋白，量太大，网住了大量的Exosome，DTT和CHAPS处理绝对影响細胞和E×osome的完整性 ...

很有道理，总的来说，最大的问题在于样本变异大。与血清样本处理起来相比，尿液样品要简单多了
作者: evomicscience    时间: 2015-6-3 10:42
是的，血浆虽然复杂，但用柱子纯化后收率和纯度都很好.但需要取血，尿液易得到，病人在家里就能自巳做，简单快速浓缩样品提高灵敏度就能提高检出率.
作者: evomicscience    时间: 2015-6-3 10:56
少量的血浆样品(少于1ml)经柱子纯化，纯度和收率都很好，但大量的尿液过柱子不现实.
作者: evomicscience    时间: 2015-6-3 12:48
请送我电邮 info@evomicscience.com
作者: evilgod    时间: 2015-8-17 09:25
我们最近也在尝试做尿中外泌体，还没有开始，你提取了吗，用的试剂盒还是超速离心法，丰度怎么样
作者: 暮色恭喜发财    时间: 2015-8-17 16:33
evomicscience 发表于 2015-6-3 10:56
少量的血浆样品(少于1ml)经柱子纯化，纯度和收率都很好，但大量的尿液过柱子不现实.  ...

你说的柱子是什么柱子，主要是想除掉什么，是纯化后再抽提吗？
作者: evomicscience    时间: 2015-10-26 10:20
是SEC柱子。样品量仅柱体积的十分之一。血浆可直接过柱子，因为血浆中exosome丰度高。尿液要先浓缩，再过柱子。10ml 尿液是一个很合适的初始体积。
作者: hzangs    时间: 2015-10-26 11:19
evomicscience 发表于 2015-6-3 10:56
少量的血浆样品(少于1ml)经柱子纯化，纯度和收率都很好，但大量的尿液过柱子不现实.  ...

尿液过柱子也不是不可以。 因为考虑到尿液中大部分都是水，无机盐，氨氮化合物等小分子化合物。使用半透膜进行浓缩 再上样应该是不存在问题的。 保守估计 浓缩到上百倍 应该可以。
作者: hzangs    时间: 2015-10-26 11:20
本帖最后由 hzangs 于 2015-11-1 20:19 编辑
evomicscience 发表于 2015-10-26 10:20
是SEC柱子。样品量仅柱体积的十分之一。血浆可直接过柱子，因为血浆中exosome丰度高。尿液要先浓缩，再过柱 ...

凝胶排阻的柱子，我尝试过含血清培液浓缩50倍上样，分离结果也不错
作者: evomicscience    时间: 2015-10-26 14:19
赞赞！多谢你的回复。但也要考虑到半透膜浓缩尿液可能降低尿exosome收率。1.疏水的exosome粘在膜上，不容易回收，2.尿蛋白THP可能会网住一些exosome,3. 还可能有成本，耗时问题。尿液exosome很有前途，大家现在还没认识到。
作者: 咏咩咩    时间: 2015-11-1 17:43
evomicscience 发表于 2015-6-3 09:59
尿液最主要的问题是THP蛋白，量太大，网住了大量的Exosome，DTT和CHAPS处理绝对影响細胞和E×osome的完整性 ...

有兴趣~我在做尿液EV。想问下提了囊泡做WB看标志物前测蛋白浓度要不要加裂解液呢？有没有具体的步骤？谢谢~~
作者: 丝瓜    时间: 2015-11-1 20:17
hzangs 发表于 2015-10-26 11:20
SEC的柱子，我尝试过含血清培液浓缩50倍上样，分离结果也不错

上次您是浓缩了50倍上样的，有没有试过浓缩倍数更高的？会不会造成较大的损耗？
作者: 丝瓜    时间: 2015-11-1 20:18
hzangs 发表于 2015-10-26 11:20
SEC的柱子，我尝试过含血清培液浓缩50倍上样，分离结果也不错

上次您是浓缩了50倍上样的，有没有试过浓缩倍数更高的？会不会造成较大的损耗？
作者: hzangs    时间: 2015-11-1 20:21
丝瓜 发表于 2015-11-1 20:18
上次您是浓缩了50倍上样的，有没有试过浓缩倍数更高的？会不会造成较大的损耗？ ...

我使用qEV的凝胶排阻柱子做的试用。 样品为还exosomes-free FBS的细胞培养上清液。 50倍是我尝试的最高浓缩倍数了。 没有再高的尝试。
没有做过尿液的，不知道会怎么样。
50倍浓缩结果看，凝胶排阻柱子分离和超速离心分离 的收率差不多，不存在太大损耗。 尿液你可以自己尝试一下~
作者: 会飞的盈盈    时间: 2016-1-31 12:38
evomicscience 发表于 2015-6-3 09:59
尿液最主要的问题是THP蛋白，量太大，网住了大量的Exosome，DTT和CHAPS处理绝对影响細胞和E×osome的完整性 ...

我也做尿液方面，能不能留个联系方式
作者: Mxiansheng    时间: 2016-2-16 16:49
evomicscience 发表于 2015-6-3 09:59
尿液最主要的问题是THP蛋白，量太大，网住了大量的Exosome，DTT和CHAPS处理绝对影响細胞和E×osome的完整性 ...

如何消除THP蛋白呢

作者: evomicscience    时间: 2016-2-22 08:27
会飞的盈盈 发表于 2016-1-31 12:38
我也做尿液方面，能不能留个联系方式

evomicscience@163.com
作者: 咏咩咩    时间: 2016-2-23 11:01
Mxiansheng 发表于 2016-2-16 16:49
如何消除THP蛋白呢

很多是用DTT或者CHAPS的...看过一篇文献用胰酶的..
作者: 丫丫    时间: 2016-10-24 11:22
evomicscience 发表于 2015-6-3 09:59
尿液最主要的问题是THP蛋白，量太大，网住了大量的Exosome，DTT和CHAPS处理绝对影响細胞和E×osome的完整性 ...

您好，您说尿液中的Exosome含量太低，那一般从尿液中提的话要用多少体积呢？
作者: konggy    时间: 2016-11-14 15:24
尿液变化大，有没有一个推荐的取样方式，比如说晨尿撒的，不能饮食或者别的条件。
作者: jlj1917576238    时间: 2017-2-9 19:50
hzangs 发表于 2015-10-26 11:19
尿液过柱子也不是不可以。 因为考虑到尿液中大部分都是水，无机盐，氨氮化合物等小分子化合物。使用半透 ...

大神，用于浓缩的半透膜的型号是怎样的？可以浓缩到五十倍吗？
作者: CheungKL    时间: 2019-6-5 10:49
evomicscience 发表于 2015-6-3 09:59
尿液最主要的问题是THP蛋白，量太大，网住了大量的Exosome，DTT和CHAPS处理绝对影响細胞和E×osome的完整性 ...

你好，我也在做尿液外泌体的biomarker，可以交流一下吗
作者: shuizhu    时间: 2019-10-9 14:35
请问楼主是怎么刷选特定外泌体的
作者: 120625    时间: 2019-11-14 17:29
科研小白请教：精液中提取外泌体容易吗？



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