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标题: 关于SBI试剂提取Exo, 如何浓缩细胞上清 [打印本页]

作者: medjinjuan 时间: 2016-10-6 23:40
标题: 关于SBI试剂提取Exo, 如何浓缩细胞上清
看坛子里不少同学提到用kit提取exo之前，可以用超滤管浓缩一下，那想请教做过的同学几个问题哈1.使用100kd的管子吗，多少转离心多久，这个有protocol吗？
2.一般是用10ml的培养基，可以浓缩到多少啊？
求指导！！！！

作者: 惜名 时间: 2016-10-7 09:17
1、是用100kd的管子，买的时候，会给说明书的。我记得说明书建议是3000rpm*5min，但实际操作的时候可以自己调整，我一般是先用3000rpm转5min，拿出来看看浓缩了多少，然后再酌情考虑是否再离心一次。
2、我个人经验，10ml的培养基可以浓缩到1-2ml。但是，私下里认为，浓缩以后再用SBI试剂盒，杂质可能会更多。因为我用过浓缩和非浓缩的方法，感觉前者提取的“沉淀”明显增加了。

后来，我对SBI的protocol做了改良：先是1500rpm*30min，然后13000rpm*20min(这个转速是参考RIPA提取蛋白的，目的是进一步去除大分子和细胞碎片，选择13000rpm是因为，普通的离心机只能达到这个速度了)，然后再过0.22um的滤器，进一步去除大颗粒。

然后再用100kd的管子浓缩，这样纯度会增加不少~
即使不用管子浓缩，这样的步骤也有利于增加纯度。

供参考~

作者: medjinjuan 时间: 2016-10-7 09:41

非常感谢，能有这样的交流，

作者: medjinjuan 时间: 2016-10-7 10:53

请问，你用SBI提取的exo打过电镜吗？是不是kit提取的很难出好看的图啊，

作者: medjinjuan 时间: 2016-10-7 10:54

请问，你用SBI提取的exo打过电镜吗？是不是kit提取的很难出好看的图啊。

作者: 惜名 时间: 2016-10-7 19:16

打过，嗯，杂质比较多，做了几次，才勉强满意。到了审稿人手里，也argue了一番，反正最后通过了，哈哈

作者: dancing 时间: 2016-10-8 12:24
我用的15ml的100KD的超滤管是4000转大约是2000多g离心了20分钟离心到250μl左右，因为细胞房里的离心机比较小，要是用3000g离心时间可能可以缩短

作者: medjinjuan 时间: 2016-10-13 13:30

大神大神，我看你写的改良的方法是最后再用100KD的超滤管子浓缩，而不是最开始就用，是我理解有误解了吗？

作者: 惜名 时间: 2016-10-13 18:28

嗯，最后再用啊~前面你先用各种方法把能去掉的杂质都去掉，然后再浓缩，应该会使浓缩液不那么粘稠吧，个人感觉。。。如果一开始就浓缩，那么多杂质混在最后的浓缩液里，后面处理如果充分的话，应该也行~~

作者: medjinjuan 时间: 2016-10-14 12:00

好的，谢谢大神啦·

作者: zjm337 时间: 2016-12-21 17:27

你好，想问一下100KDa浓缩时exosome不会被离心出去吗？？100KDa可以通过尺寸为多少纳米的颗粒？每次提取exosome你用多少体积的细胞培养基呢？要加多少SBI试剂？5mlSBI试剂能提取几次呢？

作者: 惜名 时间: 2016-12-24 20:21

1、不会
2、不知道
3、看细胞分泌能力，我养DC，分泌很厉害
4、1/5
5、25ml培养基啊（浓缩后的也可以）

作者: zjm337 时间: 2016-12-27 08:53

好的，谢谢

作者: 荥岳xingyue 时间: 2017-2-14 15:45
请问你的SBI试剂盒是在哪家公司购买的？国内代理这款产品的很多呢。

作者: 石628 时间: 2017-7-26 10:26

你好，上清浓缩之后，是取上室的液体还是下室的

作者: 石628 时间: 2017-7-26 10:29

你好，请问一下，浓缩后液体是取上室还是下室

作者: lczyld 时间: 2017-9-1 08:40

大神，大神，能否指导一下。我是这样做的； exosome-free FBS 培养细胞 48h 之后收集上清，离心之后，0.22 UM过滤，Amicon Ultra-15 100K NMWL进行浓缩。请问您用管子浓缩时离心力和时间分别是怎样的？

作者: wu1998 时间: 昨天 11:02

老师，请问超滤管浓缩以后就可以增加上清中的外泌体浓度吗？那剩下的上清液里面是什么呀？离心外泌体不应该需要很大的离心力才会沉淀附着吗？超滤管3000转就可以把外泌体浓缩到浓缩后的液体中了吗？
小白问题幼稚还多，不还意思啦老师

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