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标题: exosome的小鼠实验 我又要重新开始了 [打印本页]
作者: hzangs    时间: 2015-4-1 21:03
标题: exosome的小鼠实验 我又要重新开始了
本帖最后由 hzangs 于 2015-7-12 19:01 编辑

经过了接近3个月的休整和方案调整。我又要开始跳坑了。我要开始做exosome training 小鼠微环境的动物实验了。上次一口气做了近3个月，每个周分离二百多微克的exosome，这次又要来了。过来立个帖子，激励一下自己!!!





PS:书于2015-7-12    小鼠实验已经结束，通过膝盖处穿刺分别注射高、低转移细胞株分泌的exosome， training小鼠骨微环境，每周2次，一次3ug/只，持续一个月。之后心脏注射中等转移能力肿瘤细胞株构建骨转移模型。追踪转移情况，持续6周。
结果，注射高转移细胞株exosome的一组小鼠转移能力确实比另一组要高一些。但是BLI检测转移信号强度差异在2倍左右，差异倍数过小。因此动物实验提前结束，没有进行后续的继续研究。准备从体外实验入手开始研究exosome是否对转移具有影响。
建议大家以后可以考虑先从体外实验入手，再逐渐上动物实验，可能会更靠谱些。
作者: 晓庆妞87    时间: 2015-4-1 22:34
支持！有趣有又有难度的实验！
作者: 大琳宝儿    时间: 2015-4-2 08:05
做小鼠？是在体exosome实验吗？那你们有没有从组织中试图提取exosome啊？还是提取exosome回注体内的方法？
作者: 惜名    时间: 2015-4-2 10:06
怒赞！
作者: nene    时间: 2015-4-3 10:02
很弱弱地问，啥是 exosome training 小鼠微环境？
是我断错了句了？
作者: 向荣y    时间: 2015-4-15 14:33
亲 你用于动物实验的外泌体浓度多高啊？一周二百多微升的外泌体需要二百多毫升的上清吧？得养了六七十瓶细胞？
作者: hzangs    时间: 2015-4-15 16:13
大琳宝儿 发表于 2015-4-2 08:05
做小鼠？是在体exosome实验吗？那你们有没有从组织中试图提取exosome啊？还是提取exosome回注体内的方法？ ...

我是将细胞系分泌的exosome 重新输入到小鼠的循环系统中。
作者: hzangs    时间: 2015-4-15 16:15
nene 发表于 2015-4-3 10:02
很弱弱地问，啥是 exosome training 小鼠微环境？
是我断错了句了？

exosomes training mice micro-environment

意思就是使用外源的exosomes打回小鼠体内，来影响改造小鼠一些特定器官的微环境
作者: hzangs    时间: 2015-4-15 16:17
向荣y 发表于 2015-4-15 14:33
亲 你用于动物实验的外泌体浓度多高啊？一周二百多微升的外泌体需要二百多毫升的上清吧？得养了六七十瓶细 ...

亲
我是用蛋白定量的方法来衡量exosomes的量。这次试验基本上每周收100-200ug exosomes。
我是做肿瘤细胞exosomes的，基本上需要15cm dish 20盘-25盘
作者: 向荣y    时间: 2015-4-15 17:45
hzangs 发表于 2015-4-15 16:17
亲
我是用蛋白定量的方法来衡量exosomes的量。这次试验基本上每周收100-200ug exosomes。
我是做肿瘤细胞 ...

哦哦，我用的25cm2的培养瓶养的干细胞，但是外体浓度好低啊，160ML的上清浓缩到100微升PBS-exosomes，BCA测的浓度才0.2微克每微升，作用到细胞上完全看不出变化。所以想问一下你的外体浓度是多少呢？要做动物实验，外题的量是不是要更大一些？
作者: yy8651    时间: 2015-4-15 19:01
hzangs 发表于 2015-4-15 16:17
亲
我是用蛋白定量的方法来衡量exosomes的量。这次试验基本上每周收100-200ug exosomes。
我是做肿瘤细胞 ...

你是用无血清培养还是去exosome培养？怎么分离exosome？是离心吗？
作者: hzangs    时间: 2015-4-16 12:20
向荣y 发表于 2015-4-15 17:45
哦哦，我用的25cm2的培养瓶养的干细胞，但是外体浓度好低啊，160ML的上清浓缩到100微升PBS-exosomes，BCA ...

0.2 ug/ul 也不算低了，100ul 也有20ug了。

我打老鼠  是从尾静脉带进去，每只在2-3ug
作者: hzangs    时间: 2015-4-16 12:23
yy8651 发表于 2015-4-15 19:01
你是用无血清培养还是去exosome培养？怎么分离exosome？是离心吗？

我用exosomes-free的FBS配制培液，然后用这个培液来养细胞。
exosomes-free的FBS 使用普通的FBS 在110000g超速离心8小时取上清。
作者: effiezhang66    时间: 2015-4-24 10:33
求问是用盒子提的外体还是超离呢？
作者: yy8651    时间: 2015-4-24 16:25
hzangs 发表于 2015-4-16 12:23
我用exosomes-free的FBS配制培液，然后用这个培液来养细胞。
exosomes-free的FBS 使用普通的FBS 在110000 ...

你好，有人说你这样的方法会因为血清太粘稠无法取出exosome，请问你有检测过离心后的血清中exosome的量吗？
作者: hzangs    时间: 2015-4-26 14:08
yy8651 发表于 2015-4-24 16:25
你好，有人说你这样的方法会因为血清太粘稠无法取出exosome，请问你有检测过离心后的血清中exosome的量吗 ...

我没有检测过。  这个方法是我们实验室一个去美国 David C. Lyden实验室 访问了半年的副研究员介绍给我的。他说那边一直使用这个方法。所以我就没多考虑 直接拿来用了……
作者: yy8651    时间: 2015-4-26 15:37
hzangs 发表于 2015-4-26 14:08
我没有检测过。  这个方法是我们实验室一个去美国 David C. Lyden实验室 访问了半年的副研究员介绍给我的 ...

那是拿普通的血清直接离心11000g？不需要稀释吗？
作者: hzangs    时间: 2015-4-27 21:11
yy8651 发表于 2015-4-26 15:37
那是拿普通的血清直接离心11000g？不需要稀释吗？

我确实没有稀释。
作者: wooway    时间: 2015-5-27 20:49
想问一下你打的频率，剂量，还有周期。。。。。我准备打大鼠。。。。
作者: hzangs    时间: 2015-5-28 11:15
wooway 发表于 2015-5-27 20:49
想问一下你打的频率，剂量，还有周期。。。。。我准备打大鼠。。。。

每周两次，一次2-3ug ，连续打1个月  打的小鼠
作者: 15244762219    时间: 2015-5-29 08:39
裸鼠可不可以呢？   用exosome打鼠对鼠的品种有什么特殊要求吗？
作者: evomicscience    时间: 2015-6-1 05:10
Your exosome should be labeled using fluorescence or luciferase or others. Otherwise, you will not know how much you dosage into mouse? By the way, protein alone (BAC) is not a reliable method to quantify exosome, specially if your exosome purity is not too high. Labeled exosome (engineering exosome) will help you to get ride of this issue and figure out where the dosage exosome is homing, in liver or tumor or spleen? In addition, how do you dosage exosome? hydrodynamic IV, IP and oral. the routine is issue for dosage. The cell type for exosome production is another issue too. In short, cell type ( immune cell or solid tumor cell), the dosage routine, and labeling exosome should be considerated.
Best, John
作者: daidiu2003    时间: 2015-6-3 18:32
我想把DC的外泌体尾静脉打进去~是不是要养很多DC才可以~难度系数大概多大?e....新新新新手
作者: kadak007    时间: 2015-6-28 23:52
请教下，在用exo处理老鼠前，一般是会有体外处理细胞吧，我有这样一个疑惑：从人源性癌细胞的培养上清中提取到的exo，是不是应该优先选择去处理人源性的组织细胞（非鼠源性）？接下来，由于伦理考虑，不可能做人体试验，才使用小鼠进行功能实验。是这样考虑的吗？
谢谢~
作者: kadak007    时间: 2015-7-3 15:55
请问下，我打算在用exo做小鼠功能实验前，先进行细胞实验。如果exo来源是人细胞系，那我选用细胞时，是选人源细胞还是小鼠源细胞呢？怎么个讲究呢？
作者: hzangs    时间: 2015-7-3 17:19
kadak007 发表于 2015-7-3 15:55
请问下，我打算在用exo做小鼠功能实验前，先进行细胞实验。如果exo来源是人细胞系，那我选用细胞时，是选人 ...

都可以的。
作者: kadak007    时间: 2015-7-12 17:43
请问下，你用的是什么品系的小鼠啊？
作者: hzangs    时间: 2015-7-12 18:35
kadak007 发表于 2015-7-12 17:43
请问下，你用的是什么品系的小鼠啊？

balb/c nod
作者: 好时之梦    时间: 2015-8-30 00:32
大神，用kit提过外泌体吗？我用SBI的ExoQuick提的外泌体，做电镜没找到外泌体结构
作者: hzangs    时间: 2015-8-31 16:11
好时之梦 发表于 2015-8-30 00:32
大神，用kit提过外泌体吗？我用SBI的ExoQuick提的外泌体，做电镜没找到外泌体结构 ...

我没用过sbi的kit   但是咱们论坛里有好多人都用过。你可以问一下 johnny， 他一直 在用sbi的  并且打电镜看到了exosome
作者: yy8651    时间: 2015-8-31 23:08
好时之梦 发表于 2015-8-30 00:32
大神，用kit提过外泌体吗？我用SBI的ExoQuick提的外泌体，做电镜没找到外泌体结构 ...

我电镜下看到有exosome，但是提RNA的话量很低
作者: wgz19841005    时间: 2016-3-24 01:47
有文献说，静脉回输，在体内的半衰期特别短，考虑是巨噬细胞在其中发挥作用，将外源性的外泌体干掉了，楼主怎么看待这个问题！各种外泌体的回输有什么不同呢？
作者: hzangs    时间: 2016-3-24 10:36
wgz19841005 发表于 2016-3-24 01:47
有文献说，静脉回输，在体内的半衰期特别短，考虑是巨噬细胞在其中发挥作用，将外源性的外泌体干掉了，楼主 ...

这种东西 我不太信。  没有读过这类的paper， 我更相信外泌体本来的作用就比较弱。
作者: tylz1985    时间: 2016-3-25 05:12
大牛呀，厉害以后多多多请教呢
作者: tylz1985    时间: 2016-4-3 02:36
有没有老鼠静脉注射exosome的类似的文章呢？求推荐
新手
作者: hzangs    时间: 2016-4-4 14:11
tylz1985 发表于 2016-4-3 02:36
有没有老鼠静脉注射exosome的类似的文章呢？求推荐
新手

去搜索  David C. lyden的文章，他的文章小鼠体内实验一般通过 尾静脉或者眼底注射外泌体
作者: tylz1985    时间: 2016-4-5 05:36
hzangs 发表于 2016-4-4 14:11
去搜索  David C. lyden的文章，他的文章小鼠体内实验一般通过 尾静脉或者眼底注射外泌体 ...

谢谢大牛
作者: QWiuei    时间: 2016-5-11 12:50
Based on the assumption that 100 μg of T-exosomes are released to the peripheral tissues continuously, we used 100 μg of exosomes for injection experiments. T-exosomes (100 μg) isolated from TS/A or 4T-1 tumor removed at day 21 post tumor cell injection were injected into BALB/c mice via the tail vein twice weekly for three weeks.请问这个意思是说三周共注射100ug的外泌体吗？.
作者: lucida1973    时间: 2016-7-15 03:30
hzangs 发表于 2015-4-15 16:17
亲
我是用蛋白定量的方法来衡量exosomes的量。这次试验基本上每周收100-200ug exosomes。
我是做肿瘤细胞 ...

15cm的dish25盘，养细胞都要养吐了!!!!!!谢谢大神分享！
作者: wintersweet_d    时间: 2016-8-10 15:58
赞啊，这么高难度的实验必须赞
作者: 中义    时间: 2016-9-29 13:42
大神可以考虑T225 Flask养，我养着觉得比小瓶方便。
作者: 中义    时间: 2016-9-29 13:43
请问大神，您外泌体提出来以后，在用于动物实验前，如何保存？
作者: 中义    时间: 2016-9-29 13:46
向荣y 发表于 2015-4-15 17:45
哦哦，我用的25cm2的培养瓶养的干细胞，但是外体浓度好低啊，160ML的上清浓缩到100微升PBS-exosomes，BCA ...

请问你是什么干细胞？采用什么分离方法？我采用差速离心，3瓶T75 flask 共60ml上清Bradford法测有290ug蛋白。
作者: bkpdxpy    时间: 2016-10-31 21:54
hzangs 发表于 2015-4-15 16:17
亲
我是用蛋白定量的方法来衡量exosomes的量。这次试验基本上每周收100-200ug exosomes。
我是做肿瘤细胞 ...

那个dish是培养皿的意思吗？为什么不用培养瓶养细胞收集外泌体呢？两者有差别吗？
作者: hzangs    时间: 2016-11-1 10:13
bkpdxpy 发表于 2016-10-31 21:54
那个dish是培养皿的意思吗？为什么不用培养瓶养细胞收集外泌体呢？两者有差别吗？ ...

没差别。 只是我们实验室用培养皿 用习惯了。
作者: jaly666666    时间: 2016-12-1 20:27
请问一下大鼠可以做BLI，活体荧光成像吗？我想把exosome打入大鼠体内。
作者: hzangs    时间: 2016-12-2 13:39
jaly666666 发表于 2016-12-1 20:27
请问一下大鼠可以做BLI，活体荧光成像吗？我想把exosome打入大鼠体内。

没有试过。你可以试试，问问他们的技术人员吧。
作者: hhh313    时间: 2017-3-21 22:59
各位大神，请问如果我用乳腺癌细胞外泌体处理裸鼠，每次得打多少量？新手~~谢谢~~
作者: hzangs    时间: 2017-3-21 23:25
hhh313 发表于 2017-3-21 22:59
各位大神，请问如果我用乳腺癌细胞外泌体处理裸鼠，每次得打多少量？新手~~谢谢~~ ...

这个你可以参考一些文章。  一般一周打 5~10ug/只
作者: hhh313    时间: 2017-3-23 12:59
hzangs 发表于 2017-3-21 23:25
这个你可以参考一些文章。  一般一周打 5~10ug/只

非常谢谢~~请问您有这些文章推荐一下吗？想好好学习一下~~
作者: william    时间: 2017-3-31 22:34
加油！！！！
作者: yx11618249    时间: 2017-5-16 21:40
有用病人血浆外泌体处理老鼠的么
作者: markshar    时间: 2017-6-18 00:33
咨询一下，我最近也在尾静脉打外泌体，但遇到一个很严峻的问题，尾静脉打了之后小鼠就开始抽搐然后就挂了，像栓塞的感觉，打PBS的小鼠的没事。我是打50ug/100ul/只。可能的感觉是超离最后一步重悬的时候是不是出了问题，因为感觉很难重悬起来，很难吹散。但已经吹了很久很久目测已经很均质的才打体内的。求版主支支招
作者: 陆峰彬    时间: 2017-7-3 12:47
想请教一下，请问你实验过程中有关注过外泌体注射副作用？
作者: hzangs    时间: 2017-7-5 10:19
陆峰彬 发表于 2017-7-3 12:47
想请教一下，请问你实验过程中有关注过外泌体注射副作用？

没有关注~ 但有朋友说 容易引起巨噬细胞的激活和富集
作者: 纪南方    时间: 2017-7-6 12:10
你们都是用什么方法做的呢
作者: 301urology    时间: 2017-7-10 13:13
请问您是用什么方法进行外泌体体内示踪的呢
作者: 小豆豆的EXO    时间: 2017-11-29 18:50
感谢楼主，新手一位,从头开始学习~~
作者: SYSUCC-Deng    时间: 2017-12-15 20:20
感谢版主，受益良多。有个问题请教各位大神，人来源肿瘤细胞分离的外泌体能否注射（瘤内或静脉）到免疫力正常的小鼠（BALB/C）体内，是否会存在免疫排斥呢？
作者: 127913abc    时间: 2018-3-4 17:08
请问版主，你做的癌细胞高转移和低转移的通路时候，是需要做测序吗？然后送检样本是如何确定的，做了多少样本呢
作者: hzangs    时间: 2018-3-4 22:15
127913abc 发表于 2018-3-4 17:08
请问版主，你做的癌细胞高转移和低转移的通路时候，是需要做测序吗？然后送检样本是如何确定的，做了多少样 ...

后来没有做下去……   表型太弱了
作者: 127913abc    时间: 2018-3-5 18:46
好的，谢谢大神
作者: vivelarye    时间: 2018-6-24 21:20
楼主您好，您做过IVIS体内成像么？如果体内成像一次给30ug的Exo不知道是否可行。我在cell上看到篇文献，作者直接用30 ug/每只Exo回输，我也打算直接上30ug，每周一次，打三次。。不知道可行与否，您是否做过这么大剂量回输。期待您的回复，感谢！
作者: hzangs    时间: 2018-6-24 23:17
vivelarye 发表于 2018-6-24 21:20
楼主您好，您做过IVIS体内成像么？如果体内成像一次给30ug的Exo不知道是否可行。我在cell上看到篇文献，作 ...

对不起。这个没有做过……
作者: vivelarye    时间: 2018-7-22 16:49
hzangs 发表于 2018-6-24 23:17
对不起。这个没有做过……

依然感谢您，这个我还在摸索，体内成像还没上，打算先回输小鼠做个qPCR，想请教您，您一般外泌体回输小鼠后，几天后杀鼠取材？
作者: hzangs    时间: 2018-7-22 22:16
vivelarye 发表于 2018-7-22 16:49
依然感谢您，这个我还在摸索，体内成像还没上，打算先回输小鼠做个qPCR，想请教您，您一般外泌体回输小鼠 ...

根据自己实验目的来。 我只能告诉你 打进去的外泌体在体内应该几十个小时内就会完全代谢掉。
作者: vivelarye    时间: 2018-7-24 09:33
hzangs 发表于 2018-7-22 22:16
根据自己实验目的来。 我只能告诉你 打进去的外泌体在体内应该几十个小时内就会完全代谢掉。 ...

OK，明白了，谢谢您
作者: EVA120120    时间: 2018-7-31 20:11
向荣y 发表于 2015-4-15 17:45
哦哦，我用的25cm2的培养瓶养的干细胞，但是外体浓度好低啊，160ML的上清浓缩到100微升PBS-exosomes，BCA ...

请问你是用什么方法提取的外泌体？试剂盒还是超速离心？
作者: EVA120120    时间: 2018-7-31 20:22
有直接将外泌体心肌注射的吗？剂量是多少呢？
作者: 黄木木    时间: 2018-8-10 21:39
请问有没有人做过给小鼠尾静脉注射外泌体呀？需要保证注射的外泌体完全无菌吗？感觉我们通过超速离心提取的方法很难保证无菌
作者: urnotchristina    时间: 2019-8-5 21:38
markshar 发表于 2017-6-18 00:33
咨询一下，我最近也在尾静脉打外泌体，但遇到一个很严峻的问题，尾静脉打了之后小鼠就开始抽搐然后就挂了， ...

我们之前尾静脉打外泌体，小鼠也是这样死了，请问你后来怎样解决的？知道是什么原因吗？
作者: zhoux18    时间: 2019-9-23 12:47
urnotchristina 发表于 2019-8-5 21:38
我们之前尾静脉打外泌体，小鼠也是这样死了，请问你后来怎样解决的？知道是什么原因吗？ ...

用0.22um滤膜过滤后再注射动物可以吗？这样可能会损失一些外泌体。请问您是怎样解决这个问题的？
作者: urnotchristina    时间: 2020-3-22 09:43
zhoux18 发表于 2019-9-23 12:47
用0.22um滤膜过滤后再注射动物可以吗？这样可能会损失一些外泌体。请问您是怎样解决这个问题的？ ...

每次都过滤了，后来注射非常缓慢才没有死，或者一次剂量分多次注射，中间歇几分钟
作者: 郭密密专用账号    时间: 2020-4-21 10:50
作者: 13413657252    时间: 2021-10-15 01:06
老师，想请假下，我想做骨髓腔注射，但是感觉里面压力好大打不进去，您一般往骨髓腔内注射多少液体呀？用哪种注射器注射呢？我做的是大鼠



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