外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

标题: 有人做过利用CD63连GFP/RFP来标记外泌体吗？ [打印本页]

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作者: Johnny    时间: 2017-4-22 15:34
标题: 有人做过利用CD63连GFP/RFP来标记外泌体吗？
有人做过利用CD63连GFP/RFP来标记外泌体吗？
我最近在做，利用CRISPR/Cas9建了细胞系，细胞是有荧光的，但是提的外泌体处理了细胞靶细胞不亮。应该不会是外泌体太少的缘故，我加的外泌体量很多。
欢迎大家来探讨啊，有没有知道问题出在哪的？

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作者: hzangs    时间: 2017-4-23 11:30
请详细一点儿。你的质粒是什么 样的结构

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作者: Johnny    时间: 2017-4-23 18:01

hzangs 发表于 2017-4-23 11:30
请详细一点儿。你的质粒是什么 样的结构

如图

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作者: hzangs    时间: 2017-4-23 23:01
很显然，你外泌体携带的CD63-RFP 到达靶细胞的量不足以让你在显微镜下看到荧光 。   杂WB看看吧。

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作者: meiling    时间: 2017-4-24 14:17
你好 我也打算做 。希望可以多交流交流

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作者: meiling    时间: 2017-4-24 14:41

Johnny 发表于 2017-4-23 18:01
如图

我想问一下 你是根据哪篇文献做的呀？可以发我参考一下吗？

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作者: Johnny    时间: 2017-4-25 10:33

hzangs 发表于 2017-4-23 23:01
很显然，你外泌体携带的CD63-RFP 到达靶细胞的量不足以让你在显微镜下看到荧光 。   杂WB看看吧。  ...

可以试试

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作者: Johnny    时间: 2017-4-25 10:33

meiling 发表于 2017-4-24 14:41
我想问一下 你是根据哪篇文献做的呀？可以发我参考一下吗？

这不需要参考某个文献呀

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作者: op1116    时间: 2017-4-27 10:28

Johnny 发表于 2017-4-25 10:33
这不需要参考某个文献呀

你是买的SBI的质粒嘛？

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作者: meiling    时间: 2017-4-28 16:52

op1116 发表于 2017-4-27 10:28
你是买的SBI的质粒嘛？

不是呢 还没买

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作者: cui    时间: 2017-5-16 13:19

Johnny 发表于 2017-4-23 18:01
如图

问一下，您转染是瞬时转染，就提外泌体还是构建稳定株啊？用CRISPR/Cas9构建细胞系？什么意思？它不是用来打靶基因的吗？

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作者: cui    时间: 2017-5-16 13:22
我最近也在做这个实验  构建的是CD63-EGFP的质粒，准备用lip3000转，您都用AAV转了效率还这么低，我觉得我都不用试了

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作者: malingran    时间: 2017-6-26 15:29

Johnny 发表于 2017-4-25 10:33
可以试试

请问一下，外泌体标记转染这种带有荧光的特异性蛋白是没有问题的吧，因为我看好多人都用了PKH67这种染色剂。

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作者: malingran    时间: 2017-6-26 15:32

Johnny 发表于 2017-4-25 10:33
可以试试

请问一下，外泌体标记转染这种带有荧光的特异性蛋白是没有问题的吧，因为我看好多人都用了PKH67这种染色剂。

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作者: 摩洛哥野山羊    时间: 2021-4-19 15:49
请问您做成功了吗？可以交流下吗

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作者: 摩洛哥野山羊    时间: 2021-4-19 16:07
可以交流下吗

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