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标题: 细胞摄取外泌体激光共聚焦 [打印本页]

作者: 范范 时间: 2017-8-20 21:28
标题: 细胞摄取外泌体激光共聚焦
请问大家做过细胞摄取外泌体的激光共聚焦实验吗，除了PKH67染外泌体以及DAPI染细胞核，那细胞膜用不用再用一种染料呢，我看有的文献只用两种，那怎么区分细胞膜和外泌体膜呢？

作者: baishixiaoyaozi 时间: 2017-8-22 00:08
最好同时标记细胞膜（Dil染料或者转染表达细胞膜定位GFP）。用confocal做一个z-stack，然后3D reconstruction，就知道外泌体进没进细胞。

作者: 范范 时间: 2017-8-22 09:26

baishixiaoyaozi 发表于 2017-8-22 00:08
最好同时标记细胞膜（Dil染料或者转染表达细胞膜定位GFP）。用confocal做一个z-stack，然后3D reconstructi ...

非常感谢大神的解答，新手还需多学习

作者: atlanticocean 时间: 2017-8-24 10:07

baishixiaoyaozi 发表于 2017-8-22 00:08
最好同时标记细胞膜（Dil染料或者转染表达细胞膜定位GFP）。用confocal做一个z-stack，然后3D reconstructi ...

有相关文献吗？跪求啊

作者: baishixiaoyaozi 时间: 2017-8-24 22:27

atlanticocean 发表于 2017-8-24 10:07
有相关文献吗？跪求啊

手头还真没有，不过我就是这么做的。
细胞转染pCAG-mEGFP，外泌体用FM 1-43标记后和处理细胞。固定，DAPI染核，confocal拍照。

作者: baishixiaoyaozi 时间: 2017-8-24 22:29
本帖最后由 baishixiaoyaozi 于 2017-8-24 22:30 编辑

atlanticocean 发表于 2017-8-24 10:07
有相关文献吗？跪求啊

作者: atlanticocean 时间: 2017-8-25 11:28

baishixiaoyaozi 发表于 2017-8-24 22:29
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4382613/里面有标记exosome的protocol。

谢谢，我看看

作者: lczyld 时间: 2017-11-21 19:47
请问，你做了么？能不能分享下

作者: 范范 时间: 2018-1-10 19:24

lczyld 发表于 2017-11-21 19:47
请问，你做了么？能不能分享下

外泌体之家qq交流群里有很好的protocol可以参考一下

作者: 苏苏dog 时间: 2018-4-30 17:31

baishixiaoyaozi 发表于 2017-8-22 00:08
最好同时标记细胞膜（Dil染料或者转染表达细胞膜定位GFP）。用confocal做一个z-stack，然后3D reconstructi ...

请问一定要用confocal看吗？普通的荧光显微镜可不可以？
还有想问一下，大神用的几孔板啊？这波细胞如果用来观察外泌体和细胞的共同作用，那这批细胞之后还能用来做WB吗？非常感谢！

作者: baishixiaoyaozi 时间: 2018-4-30 20:26

苏苏dog 发表于 2018-4-30 17:31
请问一定要用confocal看吗？普通的荧光显微镜可不可以？
还有想问一下，大神用的几孔板啊？这波细胞如果 ...

Confocol的成像效果更好。
12孔板+圆形盖玻片。细胞已经固定了，没法做WB

作者: 苏苏dog 时间: 2018-5-28 10:18

baishixiaoyaozi 发表于 2018-4-30 20:26
Confocol的成像效果更好。
12孔板+圆形盖玻片。细胞已经固定了，没法做WB

好的！非常感谢！

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