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标题: 【Theranostics】NK细胞外泌体具有杀伤黑色素瘤的作用 [打印本页]

作者: Johnny    时间: 2017-8-22 22:04
标题: 【Theranostics】NK细胞外泌体具有杀伤黑色素瘤的作用
目的:外泌体是从正常细胞和肿瘤细胞释放的纳米囊泡,在细胞培养上清液和人类生物液体中可检测到。虽然以前的研究已经探索了从癌细胞释放的外泌体,但很少了解正常细胞释放的外泌体的功能。自然杀伤(NK)细胞表现出对转移性或血液恶性肿瘤的快速免疫,并且已经在临床上开发NK细胞的抗肿瘤特性。然而,源自NK细胞的外泌体的特征和功能仍然是未知的。在本研究中,研究人员在体外和体内探讨了NK细胞衍生的外泌体介导的抗侵袭性黑色素瘤的抗肿瘤作用。
方法:用增强的萤火虫萤光素酶(effluc)和thy1.1基因转染B16F10细胞,用微珠免疫筛选thy1.1阳性细胞。使用RT-PCR,蛋白质印迹和荧光素酶活性测定来鉴定所得到的B16F10/effluc细胞。通过超速离心和密度梯度超速离心分离来自NK-92MI细胞的外泌体(NK-92 Exo)。研究人员还进行了酶联免疫吸附测定法来测量保留在NK-92 Exo细胞中的细胞因子。NK-92外泌体通过透射电子显微镜和蛋白质印迹进行表征。使用生物发光成像系统(BLI)和CCK-8测定法测定NK-92Exo对癌细胞的体外细胞毒性。为了研究NK-92 Exo对健康细胞的可能副作用,研究人员还使用人肾Phoenix™-Alymp细胞系进行BLI和CCK-8测定。流式细胞术和Western印迹证实,NK-92外泌体诱导B16F10/effluc细胞凋亡。在体内,使用B16F10/effluc细胞异种移植模型来检测NK-92外泌体的免疫治疗效果。将NK-92 Exo注射到肿瘤中,并使用IVIS Lumina成像系统和超声成像监测肿瘤生长进程。在体内实验后监测肿瘤质量。
结果:RT-PCR和Western blotting检测了B16F10/effluc细胞中的effluc基因表达和蛋白水平。使用BLI测定发现B16F10/effluc活性随着细胞数量的增加而增加。对于NK-92 Exo表征,western blotting检测了超速离心和密度梯度分离的外泌体。结果证实,NK细胞衍生的外泌体表达两种典型的外泌体蛋白,即CD63和ALIX。通过蛋白质印迹分析证明NK-92 Exo提供了两种功能性NK蛋白,即穿孔素和FasL。此外还证实了FasL是在膜上表达的。酶联免疫吸附测定结果表明,NK-92 Exo可以分泌影响细胞增殖信号通路的肿瘤坏死因子(TNF)-α。通过BLI(p<0.001)和CCK-8测定(p<0.001)证实NK-92Exo对体外B16F10/effluc细胞的抗肿瘤作用。此外,在正常健康细胞中,即使在共培养24小时后,NK-92Exo也没有显示出显著的副作用。在体内实验中,与对照组相比,载体对照组肿瘤显著增加(p<0.05)。
结论:目前研究的结果表明,来自NK细胞的外泌体对黑素瘤细胞产生细胞毒作用,因此值得进一步发展为癌症的潜在免疫治疗策略。
参考文献:
Liya Zhu, Senthilkumar Kalimuthu, Prakash Gangadaran, Ji Min Oh, Ho Won Lee, Se Hwan Baek, Shin Young Jeong, Sang-Woo Lee, Jaetae Lee, and Byeong-Cheol Ahn. Exosomes Derived From Natural Killer Cells Exert Therapeutic Effect in Melanoma.Theranostics. 2017; 7(10): 2732–2745. Published online 2017 Jul 7. doi:  10.7150/thno.18752
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作者: zhangxx    时间: 2017-8-22 22:51
感谢分享
作者: 李宏帅    时间: 2017-8-25 21:40
感谢分享
作者: myshow0504    时间: 2017-8-28 23:18

作者: yelingjing317    时间: 2017-8-30 00:11
谢谢分享
作者: 只会翻身的咸鱼    时间: 2017-10-9 11:11
谢谢楼主
作者: zouxue1985    时间: 2017-11-23 10:58
楼主威武,楼主好人
作者: 13236521066    时间: 2017-12-5 08:19
感谢分享
作者: sdnujack    时间: 2017-12-5 12:17
谢谢分享!楼主最棒
作者: 白羊    时间: 2018-2-26 15:43
xiexie楼主分享
作者: xinannanxi    时间: 2018-5-22 15:28
非常感谢
作者: 王秀秀    时间: 2018-5-24 14:23
感谢分享!
作者: 李阿牛    时间: 2019-10-22 09:45
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作者: huaxiljw    时间: 2020-3-20 11:17

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作者: myjhyb    时间: 2020-12-10 17:05
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作者: Dulanlanan    时间: 2022-5-25 20:08
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