外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用
标题: 实体组织可以分离外泌体吗？当然可以！☟点击查看详细... [打印本页]
作者: Johnny 时间: 2017-8-28 15:30
标题: 实体组织可以分离外泌体吗？当然可以！☟点击查看详细...
编者按：我们都知道，我们可以从细胞培养上清、血液、尿液等各种体液、甚至各类灌洗液中提取外泌体。那么实体组织中的外泌体如何提取呢？论坛里也常有人问，比如，
有不少同学关注这个问题（相关帖子可直接点击进入讨论）。近期，JEV杂志就发表了一篇关于脑组织中提取外泌体的详细方法，在此介绍给大家，希望关注这一方面的同学有所收获。
所有细胞均可释放包括外泌体在内的细胞外囊泡，神经系统的细胞也一样。由于其能够向近端和远端细胞递送脂质、蛋白质和核酸，外泌体在神经系统的许多疾病的进展中发挥作用。迄今为止，关于这些囊泡在健康和疾病状态中的作用的大多数分析依赖于从体外来源（例如细胞条件培养基或体液）研究囊泡。该研究采取了一个关键的方法来富集和表征人额叶皮质中的外泌体。该方法可保持囊泡及其成分的完整性，并且蛋白质组学和基因组表征证实所得细胞外囊泡确实为胞内体来源的外泌体。这种方法将使神经科学家能够获得关于大脑中外泌体的更详细信息，并探讨这种形式的细胞间通讯的作用，以及脂质、蛋白质和RNA在健康的脑功能和致病条件中的独特来源。此外，该方法在从其他组织中分离外泌体可能具有重要的用途。
图：来自实体脑组织的外泌体分离方案示意图。用冰刀将新鲜冷冻（-80℃）人的额皮质在冰上切片，形成1-2cm长、2-3mm宽的切片。用含75 U/mL 3型胶原酶的Hibernate-E消化切片，37℃共20分钟。孵育后立即将组织返回到冰中，加入蛋白酶和磷酸酶抑制剂。将组织在4℃下以300×g离心5分钟（沉淀用作脑匀浆+胶原酶对照），将上清转移至新鲜管中，在4℃下以2000×g离心10分钟，然后在4℃下以10,000×g进行30分钟。将含EV的上清液铺在三蔗糖垫（0.6M，1.3M，2.5M）上，并以180,000×g超速离心3小时，以密度分离囊泡。弃去梯度的顶部并收集如图所示的1、2和3级分，并测量折射率。将每个级分进一步100,000×g超离以沉淀每个级分中所含的囊泡。每个部分通过包括电子显微镜、RNA和蛋白质分析在内的技术来组合验证。注意：一些组织样本将不适合这种方法。验尸延误、储存时间和冻融循环次数将对组织质量产生负面影响，并导致细胞碎片和非外泌体囊泡的污染。
外泌体主要富集在Fraction 2部分
参考文献：
Vella, L. J., et al. (2017). "A rigorous method to enrich for exosomes from brain tissue." J Extracell Vesicles 6(1): 1348885.
附件已隐藏，回复该贴可查看附件
作者: 功夫熊猫 时间: 2017-8-28 15:53
谢谢分享
作者: chenshasha_2009 时间: 2017-8-28 16:10
楼主辛苦了，谢谢。
作者: zlpxiangya 时间: 2017-8-28 17:14
楼主好人！
作者: chenxiaolin1985 时间: 2017-8-28 21:04
X，谢谢分分享
作者: kibana 时间: 2017-8-29 08:57
谢谢。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。
作者: 李柠岑 时间: 2017-8-29 10:49
非常感谢！
作者: kasangzc 时间: 2017-8-29 11:30
谢谢分享
作者: 冰蝶幻梦 时间: 2017-8-29 16:13
楼主辛苦了，谢谢！
作者: 只是睡着了 时间: 2017-8-31 08:44
谢谢楼主
作者: 姜姜 时间: 2017-8-31 17:21
谢谢分享
作者: tcg123 时间: 2017-9-3 21:50
想学习一下
作者: lxy_712 时间: 2017-9-4 11:13
谢谢分享~~~~
作者: pangfei 时间: 2017-9-5 22:09
谢谢分享
作者: ninechen2017 时间: 2017-9-13 15:11
谢谢分享
作者: 微微一笑 时间: 2017-10-11 22:07
学习一下，谢谢分享
作者: linzhen41 时间: 2017-10-13 11:23
谢谢楼主分享！
作者: sldingxiang 时间: 2017-10-13 12:28
刚好在做这方面的实验 受教了
作者: 魔芋舂 时间: 2017-10-25 02:39
正在学习，谢谢分享
作者: lz93046 时间: 2017-10-29 20:14
谢谢分享
作者: gaohuali1013 时间: 2017-11-3 15:43
感谢分享，希望能提出来
作者: telomerase 时间: 2017-11-3 23:56
Isolation of exosomes from heart and serum
The heart was digested using a protocol, previously described [25]. The heart homogenate was sequentially filtered through a 40 lm mesh filter (BD, Franklin Lakes, NJ, USA) and a 0.2 lm syringe filter (Thermo Scientific, Rockford, IL, USA). The filtrate was passed through a 100 kD cut-off filter (Amicon ultra 15; MIlipore Tullagreen, Carrigtwohill, Co. Cork, Ireland). Exosomes were isolated from the concentrated filtrate by using ultracentrifugation. Briefly, the filtrate was sequentially centrifuged at 300 9 g for 10 min. at 4°C, 2000 9 g for 10 min. at 4°C, and at 10,000 9 g for 30 min. at 4°C to discard cells, membranes and debris. The supernatant was centrifuged at 100,000 9 g for 70 min. at 4°C to pellet exosomes. The exosome pellet was washed with cold PBS and resuspended in 1 ml of cold PBS (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA).
作者: lcjzm 时间: 2017-11-4 22:52
谢谢分享
作者: 西城 时间: 2017-11-6 10:54
感谢分享
作者: Helen 时间: 2017-11-30 23:57
希望与大家一同学习
作者: gaocunyi 时间: 2017-12-1 17:25
多谢整理，非常有用
作者: pyhwq 时间: 2017-12-7 15:09
Thank you very much!
作者: allkyu 时间: 2017-12-11 12:38
谢谢谢谢谢谢谢谢谢谢谢谢谢谢谢谢
作者: lovecm 时间: 2017-12-11 18:51
感谢分享
作者: xiaoruan 时间: 2017-12-23 23:30
不知道有没有做肾小球外泌体提取的
作者: guodier 时间: 2017-12-25 20:51
感谢楼主分享
作者: Johnsylinan 时间: 2018-1-26 18:40
学习~学习
作者: ronaldchen 时间: 2018-1-27 10:07
ronaldchen，如果您要查
作者: lyq119 时间: 2018-2-2 16:11
谢谢，非常感谢
作者: 西海五月 时间: 2018-2-3 01:06
感谢分享！正要学习用！
作者: haks 时间: 2018-2-24 15:52
thanks for share！
作者: wocaoxiehui 时间: 2018-2-24 20:06
下文献下文献下文献下文献
作者: comfortable 时间: 2018-3-5 20:11
谢谢楼主分享 挺好的
作者: xcf201314 时间: 2018-3-7 11:07
感谢分享！
作者: xcf201314 时间: 2018-3-7 11:10
您好！能分享一下原文标题吗？不胜感激！
作者: mrcjf1250 时间: 2018-3-11 23:50
不错，组织中直接分离还是挺高的
作者: chenjinxia 时间: 2018-3-12 12:09
谢谢分享
作者: liupinyi 时间: 2018-3-12 15:08
赞！！！！赞！！！
作者: huyang31 时间: 2018-3-29 08:36
感谢楼主分享！
作者: yuesancun3344@ 时间: 2018-4-3 10:29
谢谢分享
作者: 1125062839 时间: 2018-4-18 20:31
谢谢楼主分享
作者: jarryge 时间: 2018-5-8 10:35
thanks! very
作者: Megan 时间: 2018-5-8 12:56
谢谢大神
作者: xiongqiutang 时间: 2018-5-12 19:16
作者: yang 时间: 2018-5-21 12:58
留住看一看~谢谢楼主
作者: chyshan2 时间: 2018-5-21 15:38
感谢分享！
作者: VIVIAN0527 时间: 2018-5-30 18:21
谢谢分享
作者: 阿赵 时间: 2018-6-19 22:03
楼主，我特别好奇这个组织提取外泌体的话，那么我们至少需要得到多少体积的上清液呢？ 应该不需要像上清液那么多吧？ 有人做过吗，能不能给个参考呀？
作者: 阿赵 时间: 2018-6-19 22:04
各位前辈，我特别好奇这个组织提取外泌体的话，那么我们至少需要得到多少体积的上清液呢？ 应该不需要像上清液那么多吧？ 有人做过吗，能不能给个参考呀？
作者: 重医陈旭阳 时间: 2018-6-21 09:36
赞赞赞赞赞赞赞赞赞
作者: yyyyy 时间: 2018-7-5 14:29
谢谢分享！
作者: Nightelf 时间: 2018-7-9 09:49
万分感谢，辛苦啦
作者: 淡漠如初 时间: 2018-7-18 11:32
谢谢分享
作者: 小虫子 时间: 2018-8-21 11:43
学习学习
作者: 乐行 时间: 2018-8-22 11:34
谢谢楼主分享！很棒！
作者: qiaobmu 时间: 2018-9-1 22:28
正需要呢
作者: marshall 时间: 2018-9-2 10:41
感谢分享
作者: lwf307091811 时间: 2018-9-2 18:41
非常需要，求赐教
作者: 简草苍苍 时间: 2018-9-3 07:52
厉害了厉害了
作者: Cloud100 时间: 2018-12-2 20:30
http://www.exosome.com.cn/forum. ... amp;_dsign=2ecc01f8
作者: mini 时间: 2018-12-3 12:36
XIEXIELOUZHU
作者: huangjb 时间: 2019-1-9 17:31
lz辛苦，，，，
作者: wsw 时间: 2019-1-25 12:19
谢谢,这篇文章的内容很好，脑组织分离外泌体。
作者: Wim 时间: 2019-1-25 19:45
SHIFEN感谢分享。
作者: KD0079 时间: 2019-1-29 11:18
赞一个，楼主辛苦了
作者: smilering 时间: 2019-1-30 14:54
感谢分享
作者: muzi1987xiaohao 时间: 2019-1-30 22:43
感谢楼主分享
作者: 周精灵 时间: 2019-2-26 15:14
感谢分享
作者: 奔爬的蜗牛 时间: 2019-5-31 19:39
你好，请问您从组织中提取的外泌体，效果怎么样呢？ 可否交流一下呀
作者: 奔爬的蜗牛 时间: 2019-5-31 19:40
你好，请问您是在组织中体取过外泌体吗，效果如何？可否分享一下您的protocol呢，谢谢？
作者: chi_biotech 时间: 2019-6-6 15:29
提示: 作者被禁止或删除 内容自动屏蔽
作者: chi_bio 时间: 2019-6-26 09:39
非常感谢！
作者: sujiachen 时间: 2019-7-29 11:20
谢谢楼主分享
作者: 枫林摇曳 时间: 2019-9-19 14:55
多谢分享
作者: yangliying 时间: 2019-9-23 01:13
谢谢分享
作者: shuizhu 时间: 2019-10-9 14:25
谢谢...............
作者: yujili 时间: 2019-10-11 19:06
谢谢分享
作者: 土川的外泌体 时间: 2019-12-22 17:03
学习了
作者: exosome19 时间: 2019-12-23 14:03
谢谢分享
作者: ianhowe 时间: 2020-1-12 19:40
谢谢分享
作者: hejiahuan 时间: 2020-1-14 17:50
感谢分享
作者: Olivia2020 时间: 2020-4-25 22:16
谢谢楼主的分享！很棒哦
作者: loewe 时间: 2020-5-14 13:54
谢谢总结，很棒
作者: 我的天空 时间: 2020-6-3 23:13
谢谢分享
作者: huaxiljw 时间: 2020-7-3 16:06
楼主辛苦了，谢谢！
作者: sante 时间: 2020-8-13 16:01
感谢分享
作者: FYX 时间: 2020-8-17 16:33
谢谢分享
作者: 范士杰 时间: 2020-8-17 16:58
谢谢分享
作者: dwtou 时间: 2020-9-2 10:46
组织外泌体很新的东东了
作者: ljblife 时间: 2020-12-15 21:31
谢谢谢谢谢谢谢谢谢谢谢谢
作者: DrLiao 时间: 2020-12-18 09:36
感谢分享
作者: Order 时间: 2020-12-18 17:04
谢谢分享
作者: mangosky 时间: 2020-12-21 10:55
谢谢分享
作者: tianyq 时间: 2021-3-31 16:45
感谢分享
作者: nancui 时间: 2021-4-20 11:49
最近咋查找相关方面，很有用
| 欢迎光临 外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用 (http://exosome.com.cn/) |
Powered by Discuz! X3.3 |
