外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用

标题: 有用DIL染料标记外泌体，观察细胞摄取实验的么？ [打印本页]
作者: lczyld    时间: 2017-11-29 09:36
标题: 有用DIL染料标记外泌体，观察细胞摄取实验的么？
有大神用DIL染料标记外泌体，观察细胞摄取实验的么？做过的，一起交流交流呀
作者: foryourj    时间: 2017-11-29 10:22
大神，你已经做了吗？我的染料还没到，打算下周做
作者: yang    时间: 2017-11-30 22:14
可以染，别超速离心，超滤纯化
作者: dlwlrma    时间: 2017-12-4 21:21
你们觉得超速离心能不能彻底除去多余的染料啊。我做了一次预实验，超离去了一次，结果发现胞内确实有荧光信号（亮点），但是细胞膜也被染上了，虽然信号较弱，看了hzangs的分享，也觉得这个方法确实存在弊端。
作者: pudding    时间: 2017-12-13 11:04
我们用超速离心的方法，好像没什么问题
作者: dlwlrma    时间: 2017-12-18 15:44
你们用的浓度多少啊，我看到一篇文献上说100ng/ml的exosome，加入6ul 100μM 的Dil。找了好多其他文章没有看到具体用量，大家都分享分享呗~
作者: 380522101    时间: 2018-2-23 21:30
yang 发表于 2017-11-30 22:14
可以染，别超速离心，超滤纯化

请教大神，我用CM-DiI染色，不加外泌体，在荧光显微镜下可以看到染料的小颗粒....你会出现这种情况吗？
作者: 380522101    时间: 2018-2-23 21:30
pudding 发表于 2017-12-13 11:04
我们用超速离心的方法，好像没什么问题

请教大神，我用CM-DiI染色，不加外泌体，在荧光显微镜下可以看到染料的小颗粒....你会出现这种情况吗？
作者: yang    时间: 2018-3-5 21:25
380522101 发表于 2018-2-23 21:30
请教大神，我用CM-DiI染色，不加外泌体，在荧光显微镜下可以看到染料的小颗粒....你会出现这种情况吗？ ...

会的，不知道什么原因
作者: whulf    时间: 2018-10-5 22:26
I am using the lipophilic dye DiI for Extracellular vesicles staining . You can use spin column to get rid of the Excessive dye .
作者: biqiuchen1    时间: 2019-4-10 14:19
各位有具体标记的protocles吗？急求
作者: hzangs    时间: 2019-4-11 13:18
biqiuchen1 发表于 2019-4-10 14:19
各位有具体标记的protocles吗？急求

这个染料和外泌体共孵育一下。然后再重新提一次外泌体  然后就可以使用了。  具体的protocol 没有
作者: biqiuchen1    时间: 2019-4-11 14:14
各位大神，有dil标记外泌体的protocles吗？能发一下吗？本人刚接触。谢谢各位
作者: biqiuchen1    时间: 2019-4-12 22:24
谢谢你。我回头试试，万分感谢
作者: kevinpw    时间: 2019-6-18 17:39
请教下用10KD的超滤膜过滤纯化的吗？
作者: 吴绍聪    时间: 2019-10-28 14:50
DiI我觉得应该要用spin column,不然超离会直接沉淀下来
作者: ffzhao    时间: 2019-10-28 16:34
DIL直接混合染色，随后100KD浓缩管洗涤（从上方多次加入PBS后离心），5-6遍后回收浓缩管里残余的溶液做uptake实验，亲测，好用！
作者: wwpapple    时间: 2020-1-7 09:12
ffzhao 发表于 2019-10-28 16:34
DIL直接混合染色，随后100KD浓缩管洗涤（从上方多次加入PBS后离心），5-6遍后回收浓缩管里残余的溶液做upta ...

您好，想请问一下，您用DiI标记过的外泌体有放冰箱储存备用吗？就是标记完可以先储存着，等到用到的时候再拿出来吗？还是标记完必须立马用？谢谢，期待您的回复
作者: ffzhao    时间: 2020-1-13 16:21
wwpapple 发表于 2020-1-7 09:12
您好，想请问一下，您用DiI标记过的外泌体有放冰箱储存备用吗？就是标记完可以先储存着，等到用到的时候 ...

外泌体是-80 分装冻存的，Dil染色后（冰上30min）转移到浓缩管，PBS洗后直接感染靶细胞。是标记后立马用，外泌体是不能反复冻融的（膜结构易破）
作者: 小黄人    时间: 2020-1-17 10:09
ffzhao 发表于 2020-1-13 16:21
外泌体是-80 分装冻存的，Dil染色后（冰上30min）转移到浓缩管，PBS洗后直接感染靶细胞。是标记后立马用 ...

你好，请问下感染靶细胞您是感染多久呢？外泌体与DiI染色时外泌体有浓度要求吗?与DiI的配比是多少呢？实验小白求指教
作者: ffzhao    时间: 2020-3-19 10:44
小黄人 发表于 2020-1-17 10:09
你好，请问下感染靶细胞您是感染多久呢？外泌体与DiI染色时外泌体有浓度要求吗?与DiI的配比是多少呢？实 ...

我做的是感染靶细胞4小时，随后弃去上清换成培养基，12h或24h即可荧光观察！外泌体浓度我没测，我取20ul用PBS稀释到1ml，加入1ul DIL（DMSO配制1mg/ml）冰上染色20分钟，后面就是浓缩管反复洗涤去除多余DIL，最后再用少量PBS洗一下管内壁，吸出来就是DIL标记的外泌体，后面与DMEM混合就可以感染靶细胞。
作者: 可可西里haha    时间: 2022-6-19 16:13
yang 发表于 2017-11-30 22:14
可以染，别超速离心，超滤纯化

请问您说的超滤纯化是使用0.22μm滤膜过滤染色好的外泌体吗



欢迎光临 外泌体之家 | 细胞外膜泡领域核心平台—exosomes & microvesicles—小膜泡大作用 (http://exosome.com.cn/) Powered by Discuz! X3.3